170670. lajstromszámú szabadalom • Eljárás peptid-peptidohidroláz-típúsú proteolitikus enzimek mennyiségének meghatározására, és eljárás a reagensek előállítására
11 m67° 12 b) lépés: H-Phe-Phe-Val-Arg-pNA • HCl (IV) Kiindulási anyagként 92,9 mg (0,107 mmol) (IVa) képletű vegyületet használunk. A reakciót az 1. példa g) lépésében leírt módon végezzük. A nyers terméket 50%-os ecetsavban Sephadex G—25 gélen szűrjük. Az eluátumot fagyasztva szárítjuk. 59,5 mg (73,1%) amorf, 9,18%-os klórtartalmú (IV) képletű vegyületet kapunk. A termék vékonyrétegkromatográfiásan (futtatószer: A elegy) egységes, [ot]" = —19,7° (c=0,76, 50%-os ecetsavban). Aminosav-elemzés eredménye: Val: 1,0; Phe: 2,2; Arg: 0,98. 5. példa Na -p-Me-Bz-Phe-Val-Arg-pNA • HCl (V) a) lépés: N«-p-Me-Bz-Phe-Val-Arg(N02 )pNA (Va) Kiindulási anyagként 155 mg (0,216 mmól) (Ic) képletű vegyületet és 83,2 mg (0,324 mmól) p-Me-Bz-OpNP-t (op.: 169—172 C°) használunk. A reakciót az 1. példa b) lépésében leírt módon végezzük. A nyers terméket metanolban, Sephadex LH—20 gélen szűrjük. 69,5 mg (45%) amorf (Va) képletű vegyületet kapunk, amely vékonyrétegkromatográfiásan (futtatószer: Pj elegy) egységes. MD = —26,1° (=0,69), dimetilformamidban). b) lépés: N*-p-Me-Bz-Phe-Val-Arg-pNA -HCl (V) Kiindulási anyagként 68,98 mg (0,0965 mmól) (Va) képletű vegyületet használunk fel. A reakciót az 1. példa g) lépésében leírt módon végezzük. A nyers terméket 33%-os ecetsavban, Sephadex G—15 gélen szűrjük, és az eluátumot fagyasztva szárítjuk. 44,5 mg (66%) amorf, 5,01% klórtartalmú (V) képletű vegyületet kapunk, amely vékonyrétegkromatográfiásan (futtatószer: A elegy) egységes, [oifé = - 40,8° (c = 0,70, 50%-os ecetsavban). Aminosav-elemzés eredménye: Val: 1,0; Phe: 1,0; Arg: 1,0. 6. példa N"-Ac-Phe-Val-Arg-pNA • HCl (VI) a) lépés: N0t -Ac-Phe-Val-Arg)(NO 2 )-pNA (Via) Kiindulási anyagként 233 mg (0,33 mmól) (Ic) képletű vegyületet és 41 mg (0,40 mmól) Ac2 0-t használunk fel. A reakciót az 1. példa d) lépésében leírt módon végezzük. A nyers terméket metanolban, Sephadex LH— 20 gélen szűrjük. 118 mg (66%) amorf (Via) képletű vegyületet kapunk, amely vékonyrétegkromatográfiásan (futtatószer: Pt elegy) egységes, [a]" = — 3,6° (c = = 1,16, dimetilformamidban). b) lépés: N«-Ac-Phe-Val-Arg-pNA • HCl (VI) Kiindulási anyagként 116 mg (0,185 mmól) (Via) képletű vegyületet használunk fel. A reakciót az 1. példa g) lépésében leírt módon végezzük. A nyers terméket 20%-os ecetsavban, Sephadex G—15 gélen szűrjük. Az eluátumot fagyasztva szárítjuk. 90 mg (79%) amorf, 5,59% klórtartalmú (VI) képletű vegyületet kapunk, amely vékonyrétegkromatográfiásan (futtatószer: A elegy) egységes, [a]" = —21,0° (c =0,62, 50%-os ecetsavban). Aminosav-elemzés eredménye: Val: 1,0; Phe: 1,2; Arg: 1,1. 7. példa N*-n-oktanoil-Phe-Val-Arg-pNA • HCl (VII) 10 a) lépés: N a-n-oktanoil-Phe-Val-Arg(N0 2 )-pNA-HCl (Vila) Kiindulási anyagként 207 mg (0,288 mmól) (Ic) képletű vegyületet és 109 mg (0,41 mmól) kaprilsav-15 -p-nitro-fenil-észtert használunk fel. A reakciót az 1. példa b) lépésében leírt módon végezzük. A nyers terméket metanolban, Sephadex LH—20 gélen szűrjük, 172 mg (84%) amorf (Vila) képletű vegyületet kapunk, amely vékonyrétegkromatográfiásan (futtatószer: Pt 20 elegy) egységes. [a]|>3 = —6,6° (c=0,5, dimetilformamidban). b) lépés: Na -n-oktanoil-Phe-Val-Arg-pNA • HCl (VII) 25 Kiindulási anyagként 129,4 mg (0,182 mmól) (Vila) képletű vegyületet használunk fel. A reakciót az 1. példa g) lépésében leírt módon végezzük. A nyers terméket metanolban, Sephadex LH—20 gélen, és 33%-os ecet-30 savban, Sephadex G—15 gélen szűrjük. Az eluátumot fagyasztva szárítjuk. 109 mg (85%) amorf, 4,96% klórtartalmú (VII) képletű vegyületet kapunk, amely vékonyrétegkromatográfiásan (futtatószer: A elegy) egységes. [a]g= -29,5° (c = 0,7, 50%-os ecetsavban). 35 Aminosav-elemzés eredménye: Val: 1,0; Phe: 1,0; Arg: 0,95. 8. példa 40 N«-ciklohexü-karbonil-Phe-Val-Arg-pNA • HCl (VIII) a) lépés: N a-ciklohexil-karbonil-Phe-Val-Arg(N0 2 )-45 -pNA (Villa) Kiindulási anyagként 233 mg (0,33 mmól) (Ic) képletű vegyületet és 100 mg (0,40 mmól) ciklohexilkarbonsav-p-nitro-fenil-észtert használunk fel. A reakciót az 50 1. példa b) lépésében leírt módon végezzük. A nyers terméket metanolban, Sephadex LH—20 gélen szűrjük. 117 mg (kb. 50%) amorf (Villa) képletű vegyületet kapunk, amely vékonyrétegkromatográfiásan egységes (futtatószer: Pt elegy), [ag = - 10,9° (c =0,23, dime-55 tilformamidban). b) lépés: Na -ciklohexil-karbonil-Phe-Val-Arg-pNA • HCl (VIII) Kiindulási anyagként 48,02 mg (0,069 mmól) (Villa) 60 képletű vegyületet használunk fel. A reakciót az 1. példa g) lépésében leírt módon végezzük. A nyers terméket 50%-os ecetsavban, Sephadex G—15 gélen szűrjük. Az eluátumot fagyasztva szárítjuk. 33,7 mg (71%) amorf 5,11% klórtartalmú (VIII) képletű vegyületet kapunk, 65 amely vékonyrétegkromatográfiásan (futtatószer: A 6
