170670. lajstromszámú szabadalom • Eljárás peptid-peptidohidroláz-típúsú proteolitikus enzimek mennyiségének meghatározására, és eljárás a reagensek előállítására
MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS Bejelentés napja: 1973. IV. 28. Svédországi elsőbbsége: 1972. V. 2. (5757/1972) Közzététel napja: 1977. II. 28. Megjelent: 1978. III. 31. 170670 Nemzetközi osztályozás: G 01 N 31/14 C 07 C 103/52 Feltalálók: Blombäck Gustav Erik Birger biokémikus, Solna, Blombäck Margaréta biokémikus, Solna, Claeson Karl Göran kutatóvegyész, Göteborg, Svendsen Lars-Gundro kutatóvegyész, Mölndal, Svédország Tulajdonos: AB KABI, Stockholm, Svédország Eljárás peptid-peptidohidroláz-típusú proteolitikus enzimek mennyiségének meghatározására, és eljárás a reagensek előállítására i A találmány tárgya új eljárás peptid-peptidohidroláz-típusú proteolitikus enzimek mennyiségének analitikai meghatározására. A találmány szerinti analitikai eljárás során reagensként (A) általános képletű új vegyületeket és azok savaddíciós sóit használjuk fel — ahol 5 Rj hidrogénatomot, 1—12 szénatomos alkanoil-csoportot, 1—9 szénatomos co-amino-alkanoil-csoportot, ciklohexil-karbonil-csoportot, w-ciklohexil-(l—5 szénatomos)-alkanoil-csoportot, 4-aminometil-ciklohexilkarbonil-csoportot, helyettesítetlen vagy adott 10 esetben egy vagy több metil- vagy amino-csoporttal helyettesített benzoil-csoportot, <o-fenil-(l—6 szénatomos)-alkanoil-csoportot, co-aminofenil-(l—4 szénatomos)-alkanoil-csoportot, 4-toluolszulfonil-csoportot, fenilalanil-csoportot vagy N*-benzoil-fenil- 15 alanil-csoportot jelent, R2 fenil-, benzil- vagy 4-hidroxi-benzil-csoportot jelent, R3 elágazó szénláncú, 3—5 szénatomos alkil-csoportot jelent, n értéke 3 vagy 4, 20 R4 hidrogénatomot vagy amidino-csoportot jelent, R5 nitrofenil-, naftil- vagy nitronaftil-csoportot jelent, és a jelenlevő aminosavak D, L vagy DL konfigurációjúak. Ezek a vegyületek az említett enzimekkel szemben nagy érzékenységgel rendelkeznek. A találmány tárgya to- 25 vábbá eljárás az (A) általános képletű új diagnosztikai reagensek és savaddíciós sóik előállítására. Ezeket a reagenseket osztályba sorolt és eddig még osztályba nem sorolt E. C. 3. 4. 4. típusú enzimek mennyiségi meghatározására használhatjuk fel. Az új reagenseket elsősor- 30 ban olyan enzimek meghatározására alkalmazhatjuk, amelyek a peptidek vagy fehérjék peptid-láncát az arginin vagy lizin karboxil-csoportjánál hasítják. Az utóbbi enzimek közé tartozik például a trombin, tripszin, plazmin, Reptilase (a Pentapharm cég gyártmánya, Basel, Svájc) és Arvine (a Ferring AB cég gyártmánya, Malmö, Svédország), és az eddig még osztályba nem sorolt Brinase enzim (az AB Astra cég gyártmánya, Södertälje, Svédország). Az új reagensek ezen kívül a fenti típusba tartozó enzimek képződésével, inhibeálásával vagy fogyásával járó reakciók tanulmányozására, valamint a fenti reakciókat befolyásoló tényezők vagy az azokban résztvevő anyagok (például proenzimek, aktivátorok, antienzimek és enzim-inhibitorok) meghatározására használhatók. A leírásban az enzimek osztályozásánál a The International Union of Biochemistry Elsevier (Amsterdam, 1965) által javasolt enzim-nomenklatúrát követtük. A fenti típusú enzimek kvantitatív meghatározására eddig alkalmazott reagenseket a „Methoden der enzymatischen Analyse" szakkönyv I. kötetének 1Q23 oldala (Ed. Bergmeyer, H. U., Verlag Chemie, 1970) ismerteti. Attól függően, hogy a proteolitikus enzimek az ismert reagenseken végbemenő észterolitikus vagy amidolitikus reakciót katalizálják, e szintetikus reagenseket elvben az „észter-reagensek" és „amid-reagensek" csoportjára oszthatjuk. A korábban használt szintetikus reagensek legnagyobb része az észter-reagensek közé tartozik. Ennek az az oka, hogy ezek az anyagok az 170670 1