170669. lajstromszámú szabadalom • Eljárás peptid-peptidohidroláz-típusú proteolitikus enzimek mennyiségének meghatározására, és eljárás a reagensek előállítására

11 170669 12 5,41% klórtartalmú (VII) képletű vegyületet kapunk, amely vékonyrétegkromatográfiásan (futtatószer: A elegy) egységes. [afö = - 52° (c =0,65, 50%-os ecetsavban). Aminosav-elemzés eredménye: Val: 1,0; Leu: 1,1; Arg: 0,95. 8. példa N-Bz-Ile-Val-Arg-pNA. HCl (VIII) a) lépés: Cbo-Ile-Val-Arg(N02)-pNA (Villa) Kiindulási anyagként 1,97 g (3,43 mmól) (Illa) képletű vegyületet és 1,7 g (4,2 mmól) Cbo-Ile-OpNP-t használunk. A reakciót az 1. példa b) lépésében leírt módon végezzük. A nyers terméket metanolban, Sephadex LH—20 gélen szűrjük. 2,0 g (85%) amorf (Villa) képletű vegyületet kapunk, amely vékonyrétegkromatográfiásan (futtatószer: Pj elegy)egységes. b) lépés: N-Bz-Ile-Val-Arg(N02

)-pNA (VlIIb) Kiindulási anyagként 1,75 g (2,55 mmól) (Villa) képletű vegyületet és 695 mg (3,06 mmól) Bz2

0-t használunk. A reakciót a 2. példa a) lépésében leírt módon végezzük. A nyers terméket metanolban, Sephadex LH— 20 gélen szűrjük. 1,46 g (89%) amorf (VlIIb) képletű vegyületet kapunk, amely vékonyrétegkromatográfiásan (futtatószer: Pj elegy) egységes. c) lépés: N-Bz-Ile-Val-Arg-pNA.HCl (VIII) Kiindulási anyagként 319 mg (0,486 mmól) (Vl.IIb) képletű vegyületet használunk. A reakciót az 1. példa d) lépésében leírt módon végezzük. A nyers terméket 33%-os ecetsavban, Sephadex G—15 gélen szűrjük. Az eluátumot fagyasztva szárítjuk. 264 mg (84%) amorf, 5,43% klórtartalmú (VIII) képletű vegyületet kapunk, amely vékonyrétegkromatográfiásan: (futtatószer: A elegy) egységes. [a]%= -29,9° (c=0,59, 50%-os ecetsavban). Aminosav-elemzés eredménye: Val: 1,0; lie: 0,9; Arg: 1,1. 9. példa N-Bz-Val-Ile-Arg-pNA.HCl (IX) a) lépés: Cbo-Ile-Arg(N02

)-pNA(IXa) Kiindulási anyagként 4,9 g (10,4 mmól) (la) képletű vegyületet és 6,2 g (16 mmól) Cbo-Ile-OpNP-t használunk. A reakciót az 1. példa b) lépésében leírt módon végezzük. A nyers terméket metanolban, Sephadex LH— 20 gélen szűrjük. 4,75 g (78,1%) részben kristályos (IXa) képletű vegyületet kapunk, amely vékonyrétegkromatográfiásan (futtatószer: Pj elegy) egységes. [agf= +2,3° (c = l,0, dimetilformamidban). b) lépés: Cbo-Val-Ile-Arg(N02

)-pNA (IXb) Kiindulási anyagként 800 mg (1,37 mmól) (IXa) képletű vegyületet és 615 mg (1,65 mmól) Cbo-Val-OpNP-t használunk. A reakciót az 1. példa b) lépésében leírt módon végezzük. A nyers terméket metanolban, Sephadex LH—20 gélen szűrjük. 833 mg (88,5%) amorf (IXb) képletű vegyületet kapunk, amely vékonyrétegkromatográfiásan (futtatószer: Pj elegy) egységes, [a]^4

= = — 3,23° (c = 1,1, dimetilformamidban). 5 c) lépés: N-Bz-Val-íle-Arg(N02

)-pNA (IXc) Kiindulási anyagként 500 mg (0,73 mmól) (IXb) képletű vegyületet és 198 mg (0,876 mmól) Bz2

0-t használunk. A reakciót a 2. példa a) lépésében leírt módon végezzük. A nyers terméket metanolban, Sephadex 10 LH—20 gélen szűrjük. 374 mg (78%) amorf (IXc) képletű vegyületet kapunk, amely vékonyrétegkromatográfiásan (futtatószer: Pj elegy) egységes, fa]" = +1,9° (c = 0,99, dimetilformamidban). 15 d) lépés: N-Bz-Val-Ile-Arg-pNA. HCl (IX) Kiindulási anyagként 200 mg (0,305 mmól) (IXc) képletű vegyületet használunk. A reakciót az 1. példa d) lépésében leírt módon végezzük. A nyers terméket 33%-os ecetsavban, Sephadex G—15 gélen szűrjük. 20 A szűrletet fagyasztva szárítjuk. 153 mg (77,5%) amorf, 5,40% klórtartalmú (IX) képletű vegyületet kapunk, amely vékonyrétegkromatográfiásan (futtatószer: A elegy) egységes. [a]g = -56,4° (c=0,64, 50%-os ecetsavban). 25 Aminosav-elemzés eredménye: Val: 1,0; lie: 1,1; Arg: 1,1. 30 10. példa N-Bz-Val-Leu-Arg-pNA. HCl (X) a) lépés: Cbo-Val-Leu-Arg(N02)-pNA (Xa) 35 Kiindulási anyagként 880 mg (1,5 mmól) (Ib) képletű vegyületet és 670 mg (1,8 mmól) Cbo-Val-OpNP-t használunk. A reakciót az 1. példa b) lépésében leírt módon végezzük. A nyers terméket metanolban, Sephadex LH—20 gélen szűrjük. 882 mg (86%) amorf (Xa) 40 képletű vegyületet kapunk, amely vékonyrétegkromatográfiásan (futtatószer: Pj elegy) egységes, [a]" = = — 6,6° (c = 1,01, dimetilformamidban). b) lépés: N-Bz-Val-Leu-Arg(N02)-pNA (Xb) 45 Kiindulási anyagként 400 mg (0,583 mmól) (Xa) képletű vegyületet és 160 mg (0,707 mmól) Bz2

0-t használunk fel. A reakciót a 2. példa a) lépésében leírt módon végezzük. A nyers terméket metanolban, Sephadex LH—20 gélen szűrjük. 279 mg (73%) amorf (Xb) 50 képletű vegyületet kapunk, amely vékonyrétegkromatográfiásan (futtatószer: Pj elegy) egységes, [oc]" = — 0,4 (c = 1,04, dimetilformamidban). c) lépés: N-Bz-Val-Leu-Arg-pNA.HCl (X) 55 Kiindulási anyagként 150 mg (0,23 mmól) (Xb) képletű vegyületet használunk. A reakciót az 1. példában leírt módon végezzük. A nyers terméket 33%-os ecetsavban, Sephadex G—15 gélen szűrjük. Az eluátumot fagyasztva szárítjuk. 126 mg (84,5%) amorf, 5,45% 60 klórtartalmú (X) képletű vegyületet kapunk, amely vékonyrétegkromatográfiásan (futtatószer: A elegy) egységes. [a]|3 = - 54,0° (c = 0,64, 50%-os ecetsavban). Aminosav-elemzés eredménye: Val: 1,0; Leu: 1,1; 65 Arg: 1,0. 6