170665. lajstromszámú szabadalom • Eljárás aminocukor származékok tiszta állapotban való elkülönítésére keverékeikből
25 olyan módon dolgozzuk fel, a kicsapást 200 ml acetonnal végeve; hozam: 4,0 g nyers inhibitorból 0,1 g olyan aminocukor-származék, amelyben nx + n 2 = 3, aktivitása 1,4 X106 AIE/g és 21 000 SIE/g. Az olyan aminocukor-származékot tartalmazó frakciókból, amelyben nx + n 2 = 2 (kicsapás acetonnal), 0,9 g ilyen aminocukor-származékot kapunk, amelynek aktivitása 0,3 X X106 AIE/g és 68 000 SIE/g. 10. példa 3 darab kis fermentort, amelyek 8—8 liter olyan táptalajt tartalmaznak, amelynek összetétele 7,5% malátaextraktum (száraz por), 0,3% kazeinhidrolizátum, 0,7% élesztőextraktum, 0,3% kalciumkarbonát és 0,3% K2 P0 4 , beoltunk a 4. példa szerinti, SE 50/110 törzzsel készített előkultúra 5% mennyiségével, majd 5 napon át tenyésztjük 24 °C-on. így olyan tenyészfolyadékot kapunk, amelynek aktivitása 73 SIE/ml és a képződött inhibitorok összmennyiségére vonatkoztatva 96% menynyiségben olyan aminocukor-származékokat tartalmaz, amelyekben nx + n 2 = 2. A micéliumot 30 percen át 3000 fordulat/perc sebességgel végzett centrifugálással elválasztjuk; így 20,5 liter sötétbarna színű tenyészfolyadékot kapunk, amelynek aktivitása 67 OOO SIE/liter. A folyadék pH-ját salétromsavval 3,5-re beállítjuk, és színtelenítés céljából hozzáadunk literenként 60 g Lewapol-t (Ca 9221, 0,35 mm-es szemcsék, gyártja Bayer), azaz 1,23 kg-ot. 20 percen át keverjük, majd Seitz K 3 szűrőn át leszűrjük. A színtelenített tenyészfolyadékot ammóniával semlegesítjük (18,5 liter, 67 000 SIE/liter). Ezután a hatóanyag adszorbeálása céljából literenként 20 g aktív szénnel, azaz 370 g aktív szénnel keverjük 30 percen át. Ezután olyan Seitz K 3 szűrőn át szűrjük, amelyre a Clarcel szűrési segédanyagból már egy réteget rétegeztünk. A szűrletet (17,5 liter, 3600 SIE/liter) eldobjuk. A szenes maradékot háromszor 2 liter desztillált vízzel mossuk. A hatóanyagnak a szénről való deszorbeálása céljából a szenet 15 percen át 170665 26 10 15 20 25 30 35 keverjük háromszor egymás után egy-egy liter 80%-os acetonnal, miközben a pH-t koncentrált sósavval 2,5-re állítjuk be. A deszorbátumokat egyesítjük (2,4 liter, 371 000 SIE/liter). Az egyesített deszorbátumba beadagolunk literenként 20 g, azaz 46 g Dowex H+ -t (Dowex 50 WX 4 H+-alak, gyártja Serva, Heidelberg), és 20 percen át keverjük. Ezután a gyantát kiszűrjük (Dowexfrakció I), és kismennyiségű 75%-os acetonnal utánamossuk. A szűrletet és mosófolyadékot (3 liter, 215 000 SIE/liter) literenként 60 g Amberlite IRA 410 (OH~alak) (gyártja a Serva cég, Heidelberg) ioncserélővel keverjük 7 pH-érték eléréséig. Ezután leszűrjük, és a szűrletet (2,8 liter, 219 000 SIE/liter) összekeverjük 72 g Dowex H+ gyantával, majd 20 percen át keverjük. Eközben a pH-t Amberlite IRA 410 OH- gyantával töltött porózus nylon zacskó belógatásával 3,0 értéken tartjuk. Ezután a gyantát kiszűrjük (Dowex-frakció II.), a szűrletet (2,6 liter, 27 000 SIE/liter) eldobjuk. Az egyes I. és II. Dowex-frakciókat 3,5 pH-értéken 75%-os acetonnal háromszor mossuk, majd háromszor 100 ml (Dowex-frakció I.), illetve 150 ml (Dowex-frakció II.) 0,6%-os ammóniával deszorbeáljuk. Az 1. deszorpció során, amikor a Dowex-gyanta semlegesítéséhez nem elegendő az ammóniamennyiség, a pH-t 9-re állítjuk be koncentrált ammónia hozzáadásával pH-mérő segítségével. Az I. és II. Dowex-frakció 3 deszorbátumát külön-külön egyesítjük, rotációs bepárlóban csaknem szárazra pároljuk, 50 ml vízben felvesszük, pH-ját pH-mérő segítségével sósavval 3—4-re beállítjuk, és 50 ml metanollal összekeverjük. Az oldatokat keverés közben becsepegtetjük 1,5 liter száraz acetonba, a levált csapadékot szűrjük, és acetonnal háromszor, valamint éterrel egyszer mossuk. Vákuumban szárítjuk. Hozam: I. frakció 6,5 g II. frakció 12,3 g 25 000 SIE/g 36 000 SIE/g Az I. és II. frakció gátló hatású alkotórészként 96% mennyiségben olyan aminocukor-származékot tartalmaz, amelyben nt + n 2 = 2, emellett kis mennyiségű 40 legközelebb álló magasabb homológot (nx + n 2 = 3). Kitermelés Térfogat Oiter) SIE/liter SIE összes SIE kitermelés % 1. Tenyészfolyadék 2. Lewapolos színtelenítés után 3. Aktív szenes adszorpció után 4. 1. deszorbátum 5. 2. deszorbátum 6. 3. deszorbátum 20,5 19,5 18,5 0,7 0,9 0,8 67 000 67 000 3 600 742 000 329 000 85 000 1 373 500 1306 500 66 600 519 400i 296 100[883 500 68 OOOJ 100 95 (4,8 eldobva) 37,8i 21.6V64.4 5,0J 7. Vegyes deszorbátum (4—6) 8. 1. Dowex-os adszorbció után 9. IRA OH-val végzett semlegesítés után 10. 2. Dowex-es adszorpció után 11.1. Dowex-frakció egyesített NH3 deszorbátumai 12. II. Dowex-frakció egyesített NH3 deszorbátumai 13.1. lecsapott frakció II. lecsapott frakció 2,4 3,0 2,8 2,5 0,29 0,45 6,5 g 12,3 g 371000 215 000 219 000 27 000 682 000 1 419 000 25 000/g 36 000/g 890 400 645 000 613 200 67 500 197 780 638 550 162 500 442 800 64,8 (4,9 eldobva) 14,41 [60,9 46,5 J H.8 L4 32,2 / 13
