170534. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 2- amino- 4-hidroxi- 7,8- dihidro-pteridin vegyületeket tartalmazó antimikróbás hatású szinergetikus szerek előállítására
21 170534 22 7. példa Ebben a kísérletben a trimetoprim és szulfametoxazol Staphylococcus aureussal szembeni hatását, valamint a DMHP jelenlétében fellépő hatásfokozódást vizsgáljuk. A kísérletekhez a tiszta hatóanyagokat, valamint a kettős és hármas kombinációkat használjuk fel. , A kísérletek eredményeit a 9. táblázatban foglaljuk össze. A százalékos baktericid aktivitás számításakor a 37 C°-on 24 órán át végzett inkubálás után életben maradt mikroorganizmusok számát viszonyítjuk az inokulum eredeti mikroorganizmus-számához. A felhasznált inokulum végső koncentrációja 106 mikroorganizmus/ml. A kísérlet eredményei azt mutatják, hogy DMHP távollétében sem az l,0jug/ml koncentrációjú trimetoprim, sem a 10/ug/ml koncentrációjú szulfametoxazol nem rendelkezik baktericid hatással, 10/ig/ml DMHP jelenlétében azonban jelentős baktericid aktivitás lép fel. Az 0,1 Mg/ml szulfametoxazolt tartalmazó készítmény baktericid aktivitása 10 Mg/ml DMHP jelenlétében nagymértékben fokozódik. 8. példa Ebben a kísérletben a DMHP, illetve a megfelelő 7,7-dietil-vegyület trimetoprimre (TMP) és/vagy szulfametoxazolra (SMX) kifejtett hatásfokozó képességét vizsgáljuk. Mikrorganizmusként Staphylococcus aureust és Pseudomonas aeruginosat használunk fel, és a gátló zónákat mérjük. Petri-csészébe kis timidin-tartalmú szója-pepton-táptalajt (Wellcotest Sensitivity Test Agar) töltünk, amely a pteridin-komponenst tartalmazza. A táptalajból kis rögöt távolítunk el, és az így keletkezett mélyedésbe helyezzük a további komponenst vagy komponenseket. A táptalaj felületét beoltjuk a vizsgálati mikroorganizmussal majd a rendszert inkubáljuk A gátló zónák adatait a 10. táblázatban foglaltuk össze. A Petri-csészék felületét lefényképezzük, majd körülbelül hatszoros nagyítás után lemérjük a gátló zónák sugarát a mélyedéstől, mint középponttól számítva. Az első számadat a tökéletes gátlási zóna sugarát, mint a második (zárójelbe tett) számadat a részleges gátlási zóna sugarát jelenti cm-ben. Az eredmények azt mutatják, hogy mindkét vegyület nagymértékben fokozza a TMP és SMX Staphylococcus aureussal szembeni aktivitását, és a hármas kombinációban további hatásfokozódás lép fel. A dietil-vegyület a DMHP-nál kissé aktívabbnak bizonyult. A DMHP a Pseudomonas aeruginosaval szembeni aktivitást a dietil-analógnál nagyobb mértékben fokozza. 9. példa E kísérletekben a hatásfokozószert és inhibitort és/vagy kompetitort tartalmazó, standard táptalajból készített vizsgálati korongok alkalmazhatóságát mutatjuk be. Az eredményeket a 11. táblázat ismerteti. 10. példa Egereket intraperitoneális úton 3%-os sertés-gyomornedvben szuszpendált Staphylococcus 5 aureussal fertőzünk meg. Az egereket csoportokra osztjuk, és az egyes csoportokat orálisan (p. o.) vagy intraperitoneálisan (i. p.) trimetoprimmal, szulfametoxazollal, trimetoprim-szulfametoxazol eleggyel, továbbá DMHP-t is tartalmazó kettős vagy 10 hármas kombinációkkal kezeljük. A hatóanyagokat 3 napon át naponta kétszer adjuk be. Az eredményeket a 12. táblázatban foglaljuk össze. A táblázat adatai alapján megállapítható, hogy a DMHP jelentősen fokozza a TMP és SMX hatását. 11. példa Toxoplasma gondii protozoával megfertőzött 20 egereket pirimetaminnal, szulfametoxazollal, pirimetamin-szulfametoxazol eleggyel, illetve DMHP-vel képezett kettős vagy hármas kombinációkkal kezelünk. 25 A kísérleti egereket 0,5 ml 10"3 egér-exudátummal (5000 protozoa) fertőzzük meg, amely az LD50 érték körülbelül ezerszeresének felel meg. A hatóanyagot vagy kombinációt közvetlenül a megfertőzés után, majd 6, 24 és 48 óra elteltével 30 adjuk be. Az eredményeket a 13. táblázatban foglaljuk össze. Az eredmények azt igazolják, hogy a DMHP fokozza a pirimetamin és a pirimetamin-szulfametoxazol kombináció protozoaellenes aktivitását . 12. példa Tablettás készítmény összetétele: DMHP (tiszta) 100 mg Trimetoprim (tiszta) 25 mg Szulfaguanidin (British Pharmacopeia Codex) 100 mg + kukoricakeményítő, laktóz, zselatin, talkum és magnézium szt earát A felsorolt komponenseket elegyítjük, az elegyet ismert módon granuláljuk, majd a granulátumot tablettákká préseljük. Hasonló módon állíthatjuk elő a DMHP helyett az alábbi hatóanyagokból 100-100 mg-ot tartalmazó tablettákat: 2-amino-4-hidroxi-6-metil-7,7-dimetil-7,8--dihidro-pteridin 2-amino-4-hidroxi-6-brómmetil-7,7-dimetil-7,8-dihidro-pteridin 2-amino-4-hidroxi-6-dibrórnmetil-7,7-dirnetil-7,8-dihidro-pteridin 2-amino-4-hidroxi-6-hidroximeül-7,7-dietil-7,8-dihidro-pteridin 11
