170481. lajstromszámú szabadalom • Eljárás uteroevakuáns hatóanyagok elkülönítésére növényi anyagokból

3 170481 4 Az „uteroevakuáns hatóanyag" megjelölésen olyan anyagokat értünk, amelyek melegvérüeken méhösszehúzódást, vagy a méhtartalom kivetését idézik elő. Az uteroevakuáns anyagokat általában a menstruáció előidézésére, a hólyagos üszögök kivetésére, az embrió kivetésére vagy reszorbeálására, vetélés előidézésére, szülés megindítására, valamint a méhtartalom (például embrió vagy placenta) eltávolítására használják fel. Az „A" módszert előnyösen az a) pontban ismertetettek szerint hajtjuk végre. Oldószerként előnyösen vízzel nem elegyedő rövidszénláncú alifás észtereket, így metilacetátot, etilacetátot vagy butilacetátot, alifás szénhidrogéneket, így pentánt, hexánt vagy heptánt, klórozott szénhidrogéneket, így kloroformot, széntetrakloridot, metilénkloridot vagy etilénkloridot, aromás szénhidrogéneket, így benzolt, toluolt vagy xilolt, továbbá vízzel nem elegyedő, hosszabb szénláncú alifás alkoholokat, így butanolt vagy pentanolt használunk fel. Az eljárás igen lényeges részét képezi a vizes extrakció, megjegyezzük azonban, hogy a vizes extrakció során igen jó eredményeket érhetünk el akkor is, ha a vizes fázishoz valamilyen vízzel elegyedő szerves oldószert keverünk. A szerves oldószeres extrakciót megelőző vagy azt követő vizes extrakcióhoz tehát jó eredménnyel használhatunk fel például vizes etanolt vagy vizes metanolt. Miként a következőkben részletesen ismertetjük, a vizes és szerves oldószeres extrakciós lépések közé további műveleti lépéseket is beiktathatunk. Általában tehát a következőképpen járunk el: Megfelelő mennyiségű — rendszerint körülbelül 3,5 kg — friss vagy szárított Montanoa tomentosa vagy Montanoa floribunda levélből indulunk ki. A leveleké; hideg vízzel mossuk, adott esetben daraboljuk, majd vízzel (célszerűen meleg vízzel) vagy valamely, a korábbiakban ismertetett szerves oldószerrel extraháljuk. A vizes extrakciót általában 25—100 C°-on, előnyösen a víz forráspontján végezzük. A vizes extrakció rendszerint legalább 10 percet vesz igénybe. Túl hosszú (2 órát meghaladó) extrakciós időre általában nincs szükség, sőt az extrakciós idő túlzott megnyújtása gazdaságtalan lehet. Az így kapott vizes fázist elválasztjuk a növény maradékaitól. Sötét színű oldatot kapunk. A kapott oldatot ezután szerves oldószeres extrakciónak vetjük alá. A vizes fázis extrahálásához előnyösen a vizes fáziséval azonos térfogatú szerves oldószert használunk fel. A szerves oldószeres extrakciót rendszerint szobahőmérsékletet kissé meghaladó hőmérséklettől a felhasznált oldószer forráspontjáig terjedő hőmérsékleten hajtjuk végre. Az extrakciót előnyösen a felhasznált szerves oldószer forráspontján végezzük. A szerves oldószeres extrakció ideje rendszerint 1—2 óra. Ezután a szerves oldószeres extraktumokat egyesítjük és szárazra pároljuk. A bepárlást célszerűen csökkentett nyomáson, előnyösen körülbelül 30-80 C°-on végezzük. Amint már korábban közöltük, a szerves oldószeres extrakció adott esetben megelőzheti a vizes extrakciós lépést. A két extrakciós lépést ebben az esetben is a fent ismertetett körülmények között hajtjuk végre. A két extrakciós művelet után elkülönített anyagot kívánt esetben a termék minőségének javítása céljából további oldószeres kezelésnek vethetjük alá. A további oldószeres kezelést többek között az 1. példában ismertetjük. 5 A fenti eljárással olyan uteroevakuáns hatású extraktumot kapunk, amelyben a kiindulási anyaghoz viszonyítva igen nagy mértékben csökkent a szennyezőanyagok mennyisége. Az uteroevakuáns hatóanyagok jelenlétét a nyers 10 extraktumokban a méhösszehúzó és terhesség-megszakító hatás vizsgálatával mutatjuk ki. A nyers kivonattal végzett állatkísérletekben megállapítottuk, hogy a nyers kivonat körülbelül 150-500 mg/kg-os dózisban méhösszehúzódásokat vált ki, és terhes 15 tengerimalacoknak 300—500 mg/kg-os dózisban beadva terhességmegszakítást okoz. „B" módszer 20 Az „A" módszer szerint kapott termék tartalmazza ugyan a hatóanyagokat és hasznos biológiai aktivitást fejt ki, gyógyászati szempontból azonban nem teljesen megfelelő, mert még mindig tartalmaz bizonyos mennyiségű nem-kívánt szennyezőanyagot, 25 amelyek jelenléte az uteroevakuáns hatás fellépése szempontjából szükségtelen. Az „A" módszer szerint kapott terméket a következőképpen tisztíthatjuk tovább: Kiindulási anyagként részben tisztított hatóanya-30 got (például az „A" módszer szerinti, vizes - szerves oldószeres extrakciós műveletekkel elkülönített anyagot) használunk fel. Az egyik módszer szerint a részben tisztított kiindulási anyagot először szerves oldószerben oldjuk, a kapott oldatot szűrjük, majd a 35 szűrletet a vízben oldódó és savas szennyezőanyagok eltávolítása érdekében gyenge bázis, például nátrium-hidrogénkatbonát, nátrium-karbonát vagy nátrium-acetát vizes oldatával mossuk. A mosáshoz előnyösen a bázis telített vizes oldatát használjuk fel. Szerves 40 oldószerként például rövidszénláncú alifás étereket, így dietilétert vagy dibutilétert, rövidszénláncú alifás észtereket, így metilacetátot, etilacetátot vagy butilacetátot, alifás szénhidrogéneket, így pentánt, hexánt vagy heptánt, klórozott szénhidrogéneket, így kloro-45 formot, széntetrakloridot vagy metilénkloridot, továbbá aromás szénhidrogéneket, így benzolt vagy toluolt használhatunk fel. Az oldatot betöményíthetjük és a koncentrátumot közvetlenül felhasználhatjuk a következő lépésben, eljárhatunk azonban 50 úgy is, hogy a szerves oldószert önmagában ismert módon eltávolítjuk, majd a maradékot ismét szerves oldószerrel elegyítjük. Ezután az oldatot egy adszorbenssel töltött oszlopon bocsátjuk át. Oldószerként például benzolt,toluolt vagy hasonló anyagokat, 55 míg adszorbensként kopolimereket, például vinilacetát-kopolimereket, szilikagéleket vagy alumíniumoxidot alkalmazhatunk. Különösen előnyös adszorbensnek bizonyultak a vinilacetát-kopolimerek. Az effluenst általában több frakcióban fogjuk fel, és a 60 biológiailag aktív anyag jelenlétének meghatározása érdekében valamennyi frakciót vékonyrétegkromatográfiás vizsgálatnak vetjük alá. Ha a kapott terméket tovább kívánjuk tisztítani, a hatóanyagot tartalmazó frakciókat egyesítjük, és adszorbens anyagon, például 65 szilikagélen, florisilen vagy alumíniumoxidon kroma-2