170378. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 1-[l-(-)-gamma-amino-alfa-hidroxibutiril]-kanamicin a előállítására
170378 11 12 A három vizes fázist egyesítjük és csökkentett nyomáson szárazra pároljuk, ily módon olajos maradékot kapunk, amelynek egy része szobahőmérsékleten tartva kikristályosodik. A kristályokat tartalmazó maradékhoz 100 ml metanolt adunk, amely feloldja az olajat és. elválasztja azt a kristályoktól. Körülbelül 300 ml etanol hozzáadása után a keveréket egy éjszakán át szobahőmérsékleten tartjuk, ily módon kristályos masszát kapunk, melyet megszűrünk. Súlya 44 g. A termék kis mennyiségű kanamicin A-t tartalmaz, ezt vékonyréteg kromatográfiával mutatjuk ki, n-prppanol-piridin-ecetsav-víz (15:10:3:12) oldószerrendszert és ninhidrin előhívó reagenst használva. A nyers terméket 300 ml vízben feloldjuk és G—50 ioncserélő gyanta oszlopon (30 ml átmérőjű, NHJ típus, 500 ml) átengedve kromatogtafáljuk. Az oszlopot 0,1 n ammónium-hidroxiddal felöntjük és az eluátumot 10 ml-es frakciókban összegyűjtjük. A 5 kívánt terméket a 10-100, míg a kanamicin A-t a lassabban mozgó frakciókban nyerjük ki, a termék izomerjei pedig a leggyorsabban mozgó frakciókban vannak. A 10—110. frakciókat egyesítjük és csökkentett nyomáson szárazra pároljuk, ekkor 24,6 g (45%) 10 színtelen 6-karbobenzoxikanamicin A-t [6'-Cbzkanamicin A] kapunk, melynek olvadáspontja 204 C°, 212 C°-on bomlik gázfejlődés közben. [<*]D + 106°(c = 2,H 2 O). Vékonyrétegkromatográfia (szilikagél F 254, ninhidrin) Oldószerrendszer Rf érték 6'-karbobenzoxi- kanamicin A kanamicin A n-propanol-piridin-AcOHH2 0) (15:10:3:12) Aceton-AcOH-H2 0 (20 :6 : 74) CHCls-MeOH-cNRtOHH2 0(1 :4:2:1) ACOMe-n-propanol-cNH» OH (45 :105 :60) * Antron-kénsawal detektálva A végterméket két mellékkomponens kíséri az első oldószerrendszerrel végzett vékonyréteg-kromatográ- 35 fiás vizsgálat esetén. Ennek ellenére a végterméket további tisztítás nélkül használjuk fel BB-K8 (I) vegyület készítéséhez. 5. példa 40 L-(—)-7-Amino-a-oxivajsav készítése ambutirozin A vagy B-ből, vagy ezek keverékéből Ambutirozin A-t (5,0 g) [3541 078 számú USA-beli szabadalmi leírás] forralunk 160 ml 0,5 n nátrium-hidroxiddal, visszafolyatós hűtő alkalmazá- 45 sával, egy óra hosszat. A hidrolizátumot 6 n sósavval semlegesítjük és CG-50 (NHJ típusú) oszlopon kromatografáljuk. A kívánt L-(^)-7-amino-a-oxivajsavat izoláljuk az oszlop vízzel való feltárásával, majd a víz fagyasztással való eltávolításával. Az L-(-)^y-amino-a- 50 oxivajsav a kristályos anyag, melynek olvadáspontja 212,5-214,5 C°. (3 541 078 számú USA-beli szabadalmi leírás, 2. hasáb, 31—38 sor) 55 6. példa L-(—)-7-Amino-a-oxivajsav-készítése DL-a-hidroxi-7-ftálimido vajsavból A) Dehidroabietilammónium L-a-hidroxi-7-ftálimidobutirát: 200 ml etanolban oldott 25 g (0,1 mól) 60 2 -hidroxi-7-ftálimidovajsavhoz (Tetrahedron lett, 1970. 4863) 130 ml etanolban oldott 29 g (0,1 mól) dehidroabietil-amint adunk. Az oldatot erőteljesen rázzuk egy percig és 5 óra hosszat szobahőmérsékleten állni hagyjuk, amely idő alatt finom tűs kristá- 65 0,42 ,0,33 0,15 (fő) (mellék) 0,24 0,76 0,22s1 0,04 0,14 0,50 0,04* lyok válnak ki. A kristályokat szűréssel elkülönítjük, 50 ml etanollal mossuk és levegőn megszárítjuk, ekkor 30,1 g (56%) diasztereoizomer dehidroabietilaminsót kapunk. Olvadáspont 93—94 C°. [a]% = +15° (c = 2,5, MeOH). 300 ml etanolból való átkristályoátás után 23,2 g (43%) tiszta terméket kapunk. Olvadáspontja 94-95 C°. [a% = +10,8° (c = 2,5, MeOH). További átkristályoátás nem változtat az olvadásponton és a forgatóképességen. Analízis a C32 H4 2 N 2 O s • H 2 O képletre: Számított: C 69,54, H8,02, N5,07; Talált: C 69,58, H8,08, N5,07. B) L-(—)-7-Amino-a-oxivajsav: 1,5 (0,014 mól) Natriumkarbonat 40 ml vízben képzett oldatához 5,3 g (0,01 mól) dehidroabietilammónium-L-a-hidroxi-7-ftálimidobutirátot és 60 ml étert adunk. A keveréket erőteljesen összerázzuk mindaddig, amíg az összes szilárd anyag fel nem oldódik. Az éteres réteget elválasztjuk. A vizes fázist 20 ml éterrel kétszer mossuk, majd utána csökkentett nyomáson 15 ml-re bepároljuk. A koncentrátumhoz 10 ml koncentrált sósavat adunk és ezt az elegyet 10 óra hosszat forraljuk visszafolyatós hűtő alkalmazásával. Hűtés után a kivált ftálsavat szűréssel elválasztjuk. A szűrletet csökkentett nyomáson bepároljuk. A maradékot 10 ml vízben oldjuk és az oldatot szárazra pároljuk. Ezt a műveletet kétszer megismételjük a sósavfelesleg eltávolítása céljából. A megmaradó szirupot 10 ml vízben feloldjuk és megszűrjük, a kevés oldhatatlan ftálsav eltávolítása végett. A szűrletet IR-120 (H+, lcmX35 cm) oszlopon adszorbeáltat-6
