170262. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az S-adenozil-L-metionin új kettős sóinak előállítására
170262 9 10 elegyében oldjuk. Az elegyet keverjük, majd állni hagyjuk. Ezután a szerves fázist elválasztjuk, és a vizes fázist a pikrolonsav utolsó nyomainak eltávolítása érdekében kevés metil-etil-ketonnal mossuk. A vizes fázist elválasztjuk, csontszénnel derítjük, és szűrjük. 5 16,5 ml színtelen vizes oldatot kapunk, amely literenként 33,8 g SAM-ot tartalmaz. Ennek megfelelően a kiindulási oldat SAM-tartalmának 90%-át különítettük el. Az oldat vékonyréteg kromatográfiás elemzés alapján kizárólag SAM-ot tartalmaz. A kapott 16,5 ml 10 oldatot 100 ml acetonba öntjük. Az elegyet keverjük, majd állni hagyjuk, végül a folyadékfázist dekantálással eltávolítjuk. A szilárd anyagot 6,6 g 15%-os. metanolos p-toluol-szulfunsav-oldatban oldjuk. Az oldatot csontszénnel derítjük, szűrjük, és a szűrletet 15 25 ml etiléterbe öntjük. Az elegyet állni hagyjuk, majd a kivált 0,967 g kristályos, jól szűrhető terméket leszűrjük. A termék a SAM+-HS0 4 --H 2 S(VCH 3 C 6 H4SO3 H képletnek felel meg. Elemzés a C22 H 34 Oi 6 N 6 S 4 képlet alapján: 20 számított: C: 34,46%, H:4,47%, N: 10,96%, S: 16,72%, talált: C: 33,68%, H:4,65%, N: 10,8%, S: 16,5%. SAM+:50,5% H2 0: 2,1% H2 S0 4 : 25,3%25 p-toluolszulfonsav: 21,7% A termék ultraibolya abszorpciós spektrumában 260 nm-nél jelenik meg maximum (Ef^m = 179). [a] ^ = 34,7°. Ha a fenti eljárás utolsó előtti lépésében 3,3 g 30 15%-os metanolos p-toluolszulfonsav-oldatot, utolsó lépésében pedig 25 ml etilétert használunk fel, 1,18 g SAM+-H 2 S0 4 ^CHsCgt^SOgH képletű sót kapunk, amelynek elemzési adatai azonosak az 1. példában közöltekkel. 35 A biokémiai kutatások alapján néhány éve ismertté vált, hogy a SAM az élő szervezetben lezajló, metilcsoport átadásával járó biokémiai reakciók egyetlen specifikus metil-donor reagense. Ezek a biokémiai folyamatok a zsírok, fehérjék és szénhidrátok meta- 40 bokzálódásának alapvető reakciói. Példaként a következőkben felsoroljuk a SAM-tól függő legfontosabb átmetilezési reakciókat: a) N-átmetilezés: adenin, karnitin, karnozin, kreatin, 2,6-diamino-purin, adrenalin, guanin, hordenin, 45 N'-nikotinamid, foszfatidilnkolin, ricinin; b) O-átmetilezés: N-acetil-szerotonin, dopamin, epinin, d-adrenalin, 1-adrenalin, ergoszterin, 1-noradrenalin, pektin, ubikinon; c) S-átmetüezés: 2,3-dimerkapto-propanol, kénhidro- 50 gén, metionin, metilmerkaptán, S-merkapto-propionsav, S-merkapto-etanol, triopirimidin, tiouracil; d) C-átmetilezés: citozin, timin. Ezt azt jelenti, hogy a SAM az emberi szervezetben 55 a következő anyagcsere-folyamatokban tölt be alapvető szerepet: kolin bioszintézise, foszfatidilkolin bioszintézise, -SH csoportot igénylő enzimek aktiválása, katechol-aminok metabolizálása, biogén agyközponti aminők metabolizálása, szerotonin metabolizá- 60 lása, hisztamin metabolizálása, BJ2 -vitamin és fólsav metabolizálása, kreatin metabolizálása, miozin metabolizálása, hisztonok metabolizálása, ribonukleinsavak és dezoxirobonukleinsavak metabolizálása, fehérjeanyagok metabolizálása, ciklopentán-perhidro^ 65 fenantrén-vázas hormonok (elsősorban ösztrogén hormonok) metabolizálása, és trigliceridek metabolizálása. Ismert az is, hogy a metil-transzferáz-enzim hatására demetileződött SAM S-adenozil-homociszteinné (SAO) alakul, amely közvetett szulfhidrilcsoport-donor, és így döntő szerepet tölt be minden olyan vegyület metabolizálásában, amely biológiai aktivitásának kifejtéséhez -SH csoportot igényel. E vegyületek közül különösen fontosak a tioenzimek és a kéntartalmú aminosavak. A SAO a szervezetben dekarboxileződik. Az így képződött, dekarboxilezett termék az aminopropilcsoportok elsődleges donorvegyülete, amely — a legújabb biokémiai ismeretek szerint - nélkülözhetetlen a poliaminok bioszintézisében. A folyamatot különféle enzimek katalizálják, amelyek közül a specifikus aminopropil-transzferáz enzimet említjük meg. Összefoglalva megállapíthatjuk tehát, hogy a SAM az emberi szervezetben a következő biokémiai reakciókkal áll szoros kapcsolatban: A) átmetilezés (—CH3 csoport specifikus átvitele), B) átszulfhidrilezés (-SH csoport specifikus átvitele) és C) átaminopropikzés (aminópropil-csoport specifikus átvitele). Mindezek alapján joggal tételezhetjük fel, hogy a SAM az emberi szervezetben a felsorolt biológiai reakciók rendellenességeivel kapcsolatos kóros állapotokban gyógyhatást fejthet ki. Tekintettel azonban a SAM rendkívül instabil jellegére és ana a körülményre, hogy normál körülmények között megfelelő ideig stabil SAM-származékokat mindeddig nem sikerült előállítani, e vegyületet eddig még sem farmakológiai, sem klinikai vizsgálatnak nem vetették alá, és így lehetséges gyógyhatásait sem ismerték fel. A SAM módszeres farmakológiai és klinikai vizsgálatára csak a találmány szerinti eljárással előállított, új szobahőmérsékleten korlátlan ideig stabil SAM-sók nyújtottak lehetőséget. E vizsgálatok során megállapítottuk, hogy az új SAM-sók minőségileg és hatáserősségüket tekintve egyaránt meglepő gyógyászati aktivitással rendelkeznek. Az új termékekre jellemző, általunk meghatározott rendkívül nagyszámú farmakológiai és klinikai adat közül az alábbiakban csak néhány jellegzetes csoportot ismertetünk, amelyek az új termékek biológiai sajátosságairól és gyógyászati alkalmazási lehetőségeiről szakember számára világos képet adnak. Az egyszerűség kedvéért a következőkben mindkét kettős sőt „SAM-só"-nak nevezzük, mert azok hatásai és alkalmazási területei teljes mértékben azonosak. A farmakológiai és klinikai vizsgálatok leírásánál az egyszerűség kedvéért a SAM* «HSOn "-HaSC^ -2CH3 C6 H4S0 3 H képletű sót „SAM"-nak nevezzük. A beadagolt dózisok tehát minden esetben a SAM*•HS04 "-HíSO^CHjCéfttSOaH képletű vegyületre vonatkoznak. Az adatok természetesen ugyanígy érvényesek a másik kettős sóra is. Toxicitás A találmány szerint előállított SAM-sók sem akut, sem krónikus toxicitást nem fejtenek ki, nem okoznak helyi intoleranciát, és mellékhatásmentesek. A SAM egéren meghatározott LD 50 -értéke orális 5
