170058. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az új 31 559 RP antibiotikum előállítására

15 170058 16 Szénforrás Hasznosítás Nitrogénforrás eritrit -DL-fenilalanin ado nit + L-tirozin dulcit -DL-prolin D-mannit + L-hidroxiprolin D-szorbit -L-hisztidin inozit -L-triptofán szalicin _ betain Hasznosítás + (de lassú) + + + + + (de lassú) A 31 559 RP antibiotikum előállítása lényegesen abból áll, hogy a Streptomyces hygroscopicus DS 24 367-t megfelelő táptalajon, alkalmas körülrriények között tenyésztjük, és a tenyésztés során 20 keletkezett terméket elkülönítjük. A Streptomyces hygroscopicus DS 24 367 tenyésztésére bármely felületi vagy süllyesztett aerób módszer alkalmas, de célszerűségi okokból előnyös a süllyesztett aerób tenyésztés alkalmazása. Érre a 25 célra a fermentáló iparban használatos különféle típusú készülékeket használhatjuk. A művelet a következő lépésekből állhat: Streptomyces hygroscopicus DS 24 367 törzstenyészet i tenyésztés agáron 30 35 40 tenyésztés lombikban keverés közben oltóanyag tenyésztése fermentorban termelő tenyésztés fermentorban A táptalaj lényeges alkotórészei: asszimilálható szénforrás, asszimilálható nitrogénforrás, ásványi sók, elsősorban kloridok és adott esetben növekedést elősegítő anyagok. Mindezeket az alkotórészeket jól meghatározott összetételű termékek 45 alakjában vagy a különféle eredetű biológiai anyagokban található komplex keverékekként alkalmazhatjuk. Asszimilálható szénforrásként szénhidrátok, például glukóz, dextrinek, keményítő vagy egyéb 50 szénhidrát jellegű anyagok, például cukrok, alkoholok (glicerin) vagy egyes szerves savak, például tejsav vagy citromsav használhatók. A szénhidrátok helyettesítésére vagy kiegészítésére bizonyos állati vagy növényi olajok, például bálnaolaj vagy szója- 55 olaj is alkalmas. A nitrogénforrás nagyon sokféle lehet. Használhatunk nagyon egyszerű vegyületeket például az ammónium szerves vagy szervetlen sóit, karbamidot, "egyes aminosavakat. A nitrogént főleg fehérje 60 alakjában tartalmazó bonyolult szerkezetű vegyületek, például a kazein, laktalbumin, glutin és hidrolizátumai, továbbá szójaliszt, földimogyoró-liszt, halliszt, húskivonat, élesztőkivonat, szeszmoslék, kukoricalekvár szintén használhatók. 65 A táptalajhoz adott ásványi sók közül egyesek pufferoló vagy közömbösítő hatást gyakorolhatnak, ilyenek az alkálifémfoszfátok, az alkáliföldfémfoszfátok, a kalciumkarbonát és a magnéziumkarbonát. Mások fenntartják a Streptomyces hygroscopicus DS 24 367 fejlődéséhez és a 31 559 RP antibiotikum termeléséhez szükséges ionegyensúlyt, ilyenek az alkálifémek és alkáliföldfémek kloridjai és szulfátjai. Végül mások, például a cink, vas, réz és mangán sói a Streptomyces hygroscopicus DS 24 367 anyagcseréjét aktiválják. A növekedést elősegítő anyagok például természetes vitaminjellegű vegyületek, mint a riboflavin, fólsav és pantoténsav lehetnek. A táptalaj pH-ja a tenyésztés kezdetén 5,8 - 7,8, előnyösen 6,2 - 7,4 lehet, és a fermentálás legkedvezőbb hőmérséklete 25-30 C°, de kielégítő termelés érhető el 23 C° és 33 C° között. A fermentálás folyamán a levegőztetés mértéke meglehetősen tág határok között változhat, de azt találtuk, hogy táptalaj-literenként és percenként 0,3 - 3,0 liter levegő át áramoltatása különösen jó eredményeket ad. A legnagyobb 31 559 RP kitermelést 2—8 napi tenyésztés után érjük el, ez az idő lényegileg a használt táptalajtól függ. A közöltek alapján világos, hogy a Streptomyces hygroscopicus DS 24 367 tenyésztésének általános körülményéi tág határok között változtathatók, és minden különleges igényhez alkalmazhatók. A 31 559 RP-t a fermentléből a következő módon különíthetjük el: A fermentlét savas, általában 3 és 6 közötti, előnyösen 5 körüli pH-nál szűrést elősegítő anyag jelenlétében szűréssel elválasztjuk. A hatóanyag a szűrőlepényben marad vissza, és abból alkalmas szerves oldószerrel, például kevés szénatomos alkohollal, például metanollal vagy egy klórozott szénhidrogénnel, például metilénkloriddal extrahálható. A 31 559 RP-t a kivonatból nátriumsó alakjában különíthetjük el olyan módon, hogy az. oldatot csökkentett nyomáson kis térfogatra bepároljuk, adott esetben a maradékhoz a terméket kevéssé vagy egyáltalán nem oldó oldószert adunk, majd hűtőkamrában állni hagyjuk, mire a termék kikristályosodik. 8