170058. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az új 31 559 RP antibiotikum előállítására
17 170058 18 A 31 559 RP vagy nátriumsója szokásos módszerekkel, például átkristályosítással vagy különféle adszorbeálószereken való kromatografálással vagy ellenáramú megosztással tisztítható. A következő példa korlátozó jelleg nélkül szemlélteti a találmány gyakorlati végrehajtását. A hőmérsékleti adatokat Celsius-fokban adjuk meg. pepton 1200 g élesztőkivonat 600 g glukóz-monohidrát 1200 g agar 240 g csapvízzel kiegészítve 110 literre. A termelő tenyésztést 800 literes fermentorban liajtjuk végre a következő összetételű táptalajban: szeszmoslék 2 kg szemesbab 10 kg glicerin 6 kg nátriumklorid 2kg. kobaltklorid-hexahidrát 20 g/literes oldatban 0,4 liter csapvízzel kiegészítve 365 literre, 10 1. példa a) Fermentálás 170 literes fermentorba beletöltjük a következő 15 anyagokat: 20 A táptalaj pH-ját 70 ml 10 n nátriumkarbonát-oldattal 7,3-ra állítjuk be, és a táptalajon 40 percig 25 122°-os vízgőzt átbuborékoltatva sterilizálunk. Mivel a sterilizálás közben a vízgőz részben kondenzálódik, a' lehűlés után a folyékony táptalaj térfogata 120 liter és pH-ja 6,85 lesz. A táptalajt ezután beoltjuk Erlenmeyer-lombikban keverés köz- 30 ben tenyésztett Streptomyces hygroscopicus DS 24 367 200 ml szuszpenziójával, és keverés és steril levegővel való levegőztetés közben 27°-on 25 óra hosszat inkubáljuk. A tenyészet ekkor alkalmas a termelő tenyésztésre oltóanyagként való 35 felhasználásra. 40 45 50 A táptalaj pH-ját 200 ml 10 n nátriumkarbonát -oldattal beállítjuk 7,5-re, majd a táptalajt 40 percig i22°-os vízgőz átáramoltatásával sterilizáljuk. Mivel sterilizálás közben a vízgőz részben kondenzálódik, a lehűlés után a táptalaj térfogata 390 liter lesz. Ezt a térfogatot 4 kg glukózmonohidrátot 55 tartalmazó 10 liter steril vizes oldattal 400 literre egészítjük ki. Ekkor a táptalaj pH-ja 6,65. A 170 literes fermentorból vett 40 liter oltóanyaggal beoltjuk a táptalajt, és 113 óra hosszat 27°-on inkubáljuk, miközben percenként 205 fordulatszámú turbinával keverjük, és óránként 20 m3 steril levegővel levegőztetjük. A művelet végén a fermentlé pH-ja 7,65 és térfogata 380 liter. 60 65 b) Extrák ció Az előzők szerint kapott 400 liter fermentlé pH-ját 2,8 liter 6 n sósavval 5-re állítjuk be, majd fél óra hosszat keverjük, és 20 kg szűrést elősegítő anyag hozzáadása után szűrőprésen elválasztjuk. A szűrőlepényt a szűrőn 100 liter olyan vízzel mossuk, amelynek pH-ját 6 n sósavval 5-re állítottuk be. A szüredéket és a mosófolyadékot kiontjuk. A szűrőlepényt 300 liter metanolban szuszpendáljuk, a szuszpenzió pH-ját 200 ml 6 n nátriumkarbonát-oldattal 7-re állítjuk be, és fél óra hosszat keverjük. A keveréket szűrőprésen elválasztjuk, és a szűrőlepényt a szűrőn 80 liter metanollal mossuk. A szüredéket és a mosófolyadékot egyesítve 5^10 Torr nyomáson 30 literre bepároljuk. Az így kapott maradék pH-ját 290 ml 6 n sósavval 3-ra állítjuk be, majd 30 liter metilénkloridot adunk hozzá, és 10 percig keverjük. A két fázist szétválasztjuk, és a vizes fázist ugyanilyen módon még kétszer 30-30 liter metilénkloriddal extraháljuk. A három metilénkloridos kivonatot egyesítjük, 9 liter vizet, majd keverés közben 20 ml 6n sósavat adunk hozzá, mire a vizes fázis pH-ja 3-má válik. A szerves fázist elválasztjuk, 18 liter vízzel mossuk, majd annyi nátriumkarbonátot adunk hozzá, hogy a vizes fázis pH-ja 9,5 legyen, erre a célra 20 ml 6 n nátriumkarbonát-oldat szükséges. A metilénkloridos fázist 5-10forr nyomáson 1 literre bepároljuk. c) Tisztítás Az előzők szerint kapott metilénkloridos koncentrátumot szobahőmérsékleten lassan 10 liter hexánba öntjük. Az oldatot megszűrjük, mire a szűrőn 63 g oldhatatlan inaktív anyag marad vissza. A szüredéket 5-10 Torr nyomáson bepároljuk 0,5 literre, a kapott bepárlási maradékot 0°-on 2 óra hosszat keverjük, majd 24 óra hosszat 4°-on álni hagyjuk. A kivált kristályokat az oldat centrifugálásával elkülönítjük, majd 250 ml 4°-os hexánnal mossuk, és csökkentett nyomáson szárítjuk. Ily módon 103 g 31 559 RP nátriumsót különíthetünk el. d) Átkristályosítás 57 g így kapott 31 559 RP nátriumsót 1,2 liter acetonban oldunk, az oldatot 15 percig keverjük, majd hozzáadunk sósavval mosott 2,5 g aktív szenet, ismét fél óra hosszat keverjük, és végül az aktív szenet szűréssel eltávolítjuk. A • szüredékhez keverés közben lassan 750 ml desztillált vizet adunk. A 31 559 RP nátriumsó 0°-on lassan kikristályosodik. A kivált kristályokat szűréssel elválasztjuk, aceton és víz 50 :50 térfo-9
