170005. lajstromszámú szabadalom • Eljárás parvulin előállítására mikrobiológiai úton
170005 elő. A nagy mennyiségű parvulin szintézisére képes törzsek egyszerű és hatékony módon állíthatók elő, és az izolált törzsek termelőképességüket hosszú időn át változás nélkül megtartják. A parvulinnal kezelt törzsek parvulint szintetizáló képessége 5 ugyanakkor a párhuzamos tenyésztések során a fermentációs iparban megszokottnál kevésbé széles határok között változik. A találmány szerinti eljárást az oltalmi kör korlátozása nélkül az alábbi kiviteli példákkal rész- 10 letesen szemléltetjük. burgonyakivonat* 1,5-1 glükóz 1,0% agar-agar 2,2% K-parvulin++ 0,1% 15 1. példa Streptomyces parvulus vari parvuli MNG 36 kezelése parvulinnal A Streptomyces parvulus var. parvuli MNG 36 steril desztillált vízzel készült, milliliterenként 20 106 — 5 x 107 élőképes spórát tartalmazó spóraszuszpenzióját a következő összetételű, Petri-csészékbe öntött szilárd halmazállapotú táptalajra szélesztjük: 25 A táptalaj pHját sterilezés előtt 7,0 és 7,4 közötti értékre állítjuk be, a parvulinsót steril, desztillált vízzel készült oldatként a táptalaj megdermedése előtt, sterilezés után adagoljuk. A szélesztést úgy végezzük, hogy a kontroll táptalajt tartalmazó Petri-csészékben 30-60 telep fejlődjön ki. 5-7 napon át 28 C° hőmérsékleten inkubáljuk a tenyészeteket, majd megvizsgáljuk őket. A jól fejlett telepeket a fentihez hasonló összetételű l-l ferdeagarra oltjuk, majd 5-7 napon át 28 Cc hőmérsékleten inkubáljuk. A kinőtt, érett spórák tömegéből szürke színű tenyészetekkel kétszer megismételjük a fentiekben ismertetett eljárást. Az ezután, kapott, 4-4 ferdeagarra oltott tenyésztek egyik részével 3x100-100 ml, 500 ml-es Erlenmeyer-lombikokban sterilezett, a következő összetételű táptalajt oltunk: szójaliszt 2,0% mogyoróliszt 1,0% kazein-hidrolizátum* 1,0% glicerin 5,0% NaCl 0,3% CaC03 0,5% MgCl2 • 7H 2 0 0,22% disznózsír 0,5% + Enzimesen hidrolizált, 10%-os. 30 + 0,5 kg burgonyából és 1 liter vízből készült kivonat, szárazanyagra számítva. * Két-két táptalajt, kétszeres hígítási sor szerint 150, 300, 600, 1200, 2400, 4800 és 9600/xg/ml parvulinsóval egészítünk ki, illetve 35 kontrollként antibiotikumot nem tartalmazó táptalajokat készítünk. sterilezés előtt tömény nát-7,0-re állítjuk be, majd hőmérsékleten autoklávban A táptalaj pH-ját riumhidroxid-oldattal 30 percen át 121 C° sterilezzük. Oltás után 28 C° hőmérsékleten, körkörös irányban, 8 cm kitéréssel mozgó rázóasztalon inkubáljuk a tenyészteket, majd a 72. órától sterilen mintákat veszünk a biológiai értékméréshez. Az eredményeket az 1. táblázatban adjuk meg. 1. táblázat Parvulinnal kezelt Streptomyces parvulus var. parvuli MNG 36 termelőképességének növekedése A táblázat adataiból látható, hogy a parvulin jelenlétében növekvő és spórázó törzsek termelőképessége jelentősen nő. A táptalaj par-vulin-tartalma (Mg/ml) Izolált telepek száma (db) Átlagos termelés (mg/ml) Max. termelés (mg/ml) Termelés a kontroll százalékában 0 51 2,04 2,34 100 150 63 2,95 3,10 145 300 49 3,25 3,75 159 600 39 4,38 5,24 214 1200 52 5,75 6,28 282 2400 47 6,05 6,51 296 4800 26 5,94 . 6,20 291 9600 0 , _
