170005. lajstromszámú szabadalom • Eljárás parvulin előállítására mikrobiológiai úton
170005 8 2. példa Parvulinnal kezelt Streptomyces parvulus var. parvuli MNG 36 termelőképességének változása Az 1. példa szerinti eljárással előállított ferdeagar tenyészeteket +4C° hőmérsékletű hűtőszobában tároljuk, majd havonta egy-egy tenyészetből készült desztillált vizes spóraszuszpenzióval beoltjuk az 1. példában megadott eljárással készült, Eríenmeyer-lombikokban sterilezett táptalajokat. Az 1. példában megadottak szerint tenyésztünk, majd meghatározzuk a tenyészetek biológiai aktivitását. Az eredményeket a 2. táblázatban adjuk meg. 2. táblázat A táptalaj Tárolási Átlagos Termelés parvulinideje termelés kontroll -tartalma (hónap) (mg/ml) százalé0"g/ml) kában 0 0 2,04 100 0 1 1,54 100 0 2 1,21 100 0 3 0,915 100 300 0 3,25 159 300 1 3,45 224 300 2 3,14 259 300 3 2,91 318 2400 0 6,05 296 2400 1 6,22 404 2400 2 6,32 522 2400 3 5,94 649 parvulinsót tartalmazó agárra szélesztjük a tenyészeteket. 5-7 napon át 28 C° hőmérsékleten inkubáljuk, majd a jól növekedő és/vagy spórázó telepeket az 1. példában megadott összetételű ferde-5 agarakra oltjuk. Az inkubáció után kinőtt tenyészetek termelőképessegét az 1. példában megadottak szerint ellenőrizzük, és a legjobban termelőkkel 5 liter hasznos térfogatú laboratóriumi üvegfermentort oltunk. 10 A tenyésztést 28 C° hőmérsékleten, percenként 520-at forduló keverő működtetése és percenként 5-7 liter levegő átáramoltatása közben, a következő összetételű, 1 atü túlnyomáson, autoklávban, 40 percen át sterilezett, 6,7 kezdeti pH-jű táptala-15 jon végezzük: 20 szójaliszt 2,5% mogyoróliszt 1,5% kazeín-hidrolizátum* 1,0% glicerin 5,0% NaCl 0,2% CaC03 0,5% MgCl2 • 7H 2 0 0,28% disznózsír 1,0% A táblázat adataiból látszik, hogy a parvulinnal kezelt Streptomyces parvulus var. parvuli MNG 36 termelőképessége hosszabb időtartam alatt sem változik, míg a kontroll törzs termelőképessége - amely közel háromszor kisebb - lényegesen csökken. 3. példa Streptomyces parvulus var. parvuli MNG 36 kezelése parvulinnal rázott tenyészetben 100-100 ml, 500 ml térfogatú Erlenmeyer-lombíkban sterilezett, az 1. példában ismertetett összetételű táptalajokat G 5-ös üvegszűrőn csíramentesített vizes NH4 -parvulinnal egészítünk ki. Két-két párhuzamos táptalaj 0/ng/ml, 500/ug/ml és lOOOjug/ml parvulint tartalmaz. 3,28 mg/ml parvulin szintézisére képes Streptomyces parvulus var. parvuli törzzsel oltjuk a táptalajokat, majd 28 C° hőmérsékleten 24 órán át rázóasztalon tenyésztünk. Ezt követően a sterilitás és a növekedés ellenőrzése után az 1. példában megadottak szerint eljárva, 25 30 35 40 45 + Enzimesen hidrolizált, 10%-os. A habzás gátlására steril disznózsírt adagolunk. A biológiai értékmérésre a tenyésztés 48. órájától kezdődően 24 óránként sterilen mintát veszünk a tenyészetekből. A kísérlet eredményeit a 3. táblázatban adjuk meg. 50 55 3. táblázat A rázott A törzs Termetenyészet Az agar parvumax. termelő-lőképesparvulinlin-tartalma képessége séga -tartalma kontroll (Mg/ml) (Mg/ml) (mg/ml) %-ában 0 0 (kontroll) 2,90 100 0 300 3,70 128 0 600 4,28 148 o 2400 4,15 143 500 0 3,90 135 500 300 4,35 150 500 600 6,10 210 500 2400 6,40 221 1000 0 2,80 96 1000 300 3,70 128 1000 600 4,95 171 1000 2400 5,35 184 1000 4800 4,18 144 60 A táblázat adataiból látható, hogy a parvulinnal kezelt törzsek termelőképessége esetenként több mint kétszerese a parvulinnal nem kezelt törzsek 65 termelőképességének.
