169882. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új antibiotikumok előállítására
11 169882 12 metabolitként és B metabolitként (gardimicin) definiálunk. Ezek Rf -értéke különböző, az alkalmazott eluáló rendszer természetétől függően. A nyers keveréket tovább tisztítjuk oly módon, hogy körülbelül 30 ml -vízben oldjuk. A kapott oldatot körülbelül 16 órán át desztillált vízzel szemben dializáljuk, majd vákuumban kis térfogatra koncentráljuk. 1,5 gramm nyers antibiotikumot kapunk, amely még az A metabolit és a gardimicin keveréke. A két antibiotikumot többszöri ellenára-' mú extrakcióval különítjük el és tisztítjuk annak segítségével, hogy az A komponens éá a gardimicin megoszlási együtthatója meghatározott oldószer-rendszerékben különböző. Az alkalmazott oldószer-rendszer butanol: nátrium-káliumfoszfát puffer, m/15, pH 7,2 : hexán 1:1:0,1 arányú keveréke, az A metabolit és a gardimicin megoszlási együtt-10 15 hatója ebben a közegben 0,3 illetve 0,8. 100 extrakció után 0,450 g gardimicint kapunk mononátrium-só alakjában. A butanolos extrakcióból származó anyalúgokat az A és B metabolit keverékének kicsapása után kis térfogatra töményítjük, majd fölös mennyiségű könnyű benzinbe öntjük. Gyorsan csapadék képződik, amelyet szűréssel nyerünk ki. Kromatográfiás vizsgálatok, amelyeket a fentiekkel azonos körülmények között végzünk, arra mutatnak, hogy ez a frakció egyetlen termékből áll, amelynek Rf értéke azonos élúciós rendszerekben eltei az A és B metabolitétól. Ezt a frakciót C metabolitnak nevezzük. A három metabolit különböző kromatográfiás jellemzőit az egyes eluáló rendszerekben a következő táblázatban mutatjuk be. Az A metabolit, B metabolit (gardimicin) és C metabolit kromatográfiás jellemzői Kromatográfia Whatman No.l papíron. A foltok láthatóvá tétele mikrobiológiai előhívással, Staphylococcus aureus-szal Eluáló rendszer Rf értékek A B C metabolit (gardimicin) 0,00 0,15 0,85 0,75 0,80 0,95 0,15 0,10 0,85 0,65 0,80 0,00 0,00 0,80 0,00 0,70 0,65 0,90 0,85 0,60 0,90 0,80 0,80 0,65 0,00 0,00 0,75 1. M/15 pH 6,0 foszfátpuff érrel telített butanol 2. 2% p-toluolszulfonsavat tartalmazó vízzel telített butanol 3. 2% Nr^OH-t tartalmazó vízzel telített butanol 4. butanollal telített M/15 pH 6,0 foszfátpuffer 5. 20%-os vizes NaCl-oldat 6. butanol: metanol: víz = 4 :1 :2 0,75% metilnaranccsal 7. butanol: metanol: víz = 4 :1 : 2 8. aceton : víz = 1 :1 9. vízzel telített etilacetát Vékonyréteg-kromatográfia szilikagélen. A foltok láthatóvá tétele kénsavval és vanilinnel és mikrobiológiai előhívás Staphylococcus aureus-szzal Eluáló rendszer NH4 OH: etanol: víz = 1:8:1 XA B metabolitot mononátriumsóként vizsgáltuk. 55 0,30 0,70 0,00 2. példa zoltuk. A kapott antibiotikum tisztítását és a két metabolit szétválasztását az 1. példában megadott Az 1. példában leírt módon eljárva az Actinopla- módon végezzük. 0,2 gramm gardimicint kapunk nes A/6353 (ATCC 31048) törzset aerob körül- 60 mononátriumsó formájában. menyek között tenyésztjük 130-170 órán át körül- A gardimicin mononátriumsójának fizikokémiai belül 28-30 C°-on. 1,4 gramm antibiotikumot ka- tulajdonságai. punk: ez az A metabolit és a B metabolit (gardimi- A gardimicin (mononátriumsó alakjában) amorf, cin) keveréke. A két metabolit jelenlétét az fehér, amfoter jellegű por. Izoelektromos pontja 1. példában leírt kromatográfiás vizsgálatokkal iga- 65 4,2: ezt elektrofókuszálással határoztuk meg. 6N 6
