169882. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új antibiotikumok előállítására
169882 10 6. táblázat folytatása Szén forrás Növekedés Szén forrás A/10889 A/6353 xilóz + + raffinóz • - -arabinóz + + 10 Actinoplanes species hasznosít). Az A/10889 kezdetleges légmicéliumot termel, amilyet ritkán találunk az Actinoplanes speciesek között. A két törzs könnyen megkülönböztethető valamennyi eddig ismert Actinoplanes speciestől. Ez okból az A/6353 törzset és az A/10889 törzset új Actinoplanes speciesek típustörzsének tekintjük és ezeknek az Actinoplanes ligurjae ATCC 31048 és az Actinoplanes garbadiensis ATCC 31049 nevet adtuk. 1. példa cellulóz szalicin szacharóz mannóz laktóz 15 + glukóz (pozitív kontroll) + + A 7. táblázat a két mutatja be. törzs fiziológiai jellemzőit 7. táblázat Fiziológiai jellemzők Próba A/10889 A/6353 keményítő-hidrolízis pozitív pozitív H2 S-képződés pozitív negatív melanin-termelés pozitív negatív tirozin-hidrolízis pozitív negatív kazein-hidrolízis negatív pozitív Ca-malát-hidrolízis negatív negatív lakmusz-tej-koagulálás negatív negatív lakmusz-tej-peptonizálás negatív negatív nitrát-redukció pozitív negatív zselatin-folyósítás pozitív negatív Antibiotikum-termelés, a különböző metabolitok elkülönítése és szétválasztása. Antibiotikus aktivitású anyag termelésére az Actinoplanes A/10889 (ATCC 31049) törzset aerob körülmények között elő-tenyésztjük egy táptalajban, amíg jelentős antibiotikus aktivitás halmozódik fel. Egy rázott lombik-tenyészet például a 20 következő összetételű lehet (g/liter): 25 A lombikokat körülbelül 24 órán körülbelül 28-30 C° hőmérsékleten rázatjuk, majd az előte-30 nyészeteket (1 litert) fermentorok oltására használjuk fel, amelyek az alábbi táptalajból 10 litert tartalmaznak: 35 40 45 50 55 Az A/6353 és A/10889 törzset gömb alakú sporangiumai mozgékony spórái és telep-morfológiája alapján az Actinoplanes genushoz soroljuk. Egymástól azonban egyértelműen megkülönböztethetők különböző agarokon megfigyelhető növekedésük, 60 oldható pigment termelése vagy nem-termelése, szén-hasznosításuk és fiziológiai jellemzőik alapján. Közelebbről az A/6353 nagyon korlátozott képességet mutat glukozid-kötések hidrolízisére (beleértve a szacharózt, amelyet valamennyi eddig leírt 65 húskivonat 3,0 élesztőkivonat 10,0 kalciumkarbonát 4,0 keményítő 25,0 csapviz lOOOrrd-re húskivonat 40g pepton élesztőkivonat 40g 10g NaCl 25 g szójaliszt glukóz CaC03 100 g 500 g 50 g csapviz 10 literre A fermentációt aerob körülmények között kevertetés mellett 28-30 C°-on végezzük. Időnként mikrobiológiai úton meghatározzuk az antibiotikus aktivitást agar-diffúziós módszerrel, tesztorganizmusként Sarcina lutea alkalmazásával. A maximális aktivitás 96-120 órás fermentáció után érhető el. A fermentlé pH-ját 8,0-ra állítjuk be és szűrési segédanyagként Hyflo Super-cell alkalmazásával szűrjük. A micéliumot elvetjük és a szűrletet körülbelül térfogata felének megfelelő mennyiségű butanollal extraháljuk. A szerves fázist elválasztjuk a vizestől és savas vízzel (pH 4,0) való mosás után eredeti térfogata körülbelül 1/10-ére töményítjük, majd 3-6 C° hőmérsékleten 10-12 órán át állni hagyjuk. Nyers csapadék keletkezik, amelyet szűrőn összegyűjtünk, butanollal mosunk és szobahőmérsékleten vákuumban szárítunk: kitermelés 3,0 g. Ennek a nyers csapadéknak a kromatográfiás vizsgálata Whatman No.l. papíron vagy szilikagélen, majd a foltok mikrobiológiai kifejlesztése Staphylococcus aureus-t alkalmazva kimutató rendszerként két komponens jelenlétére mutat, amelyeket A 5
