169870. lajstromszámú szabadalom • Eljárás véralvadást gátló oligopeptid-származékok előállítására
5 169870 6 1. példa D-Fenilalanil-L-prolil-L-argininaldehid-acetát előállítása 1. lépés: terc-butiloxikarbonil-NG -benziloxikarbonil-L-arginin-laktám 6,6 g (20 mmól) terc-butiloxikarbonil-L-arginin-hidroklorid-hidrátot [D. Yamashiro és munkatársai: J. Am. Chem. Soc. 94, 2855 (1972)] feloldunk 20 ml 4 n nátrium-hidroxidban, az oldatot jeges vízzel lehűtjük, majd 3,4 ml (20 mmól) benziloxikarbonil-klorid hozzáadása után 4 órán át keverjük. Azonos mennyiségű benziloxikarbonil-kloridot és 15 ml 4 n nátrium-hidroxidot adunk a reakcióelegyhez, és ismét 4 órán át keverjük. Ezután a reakcióelegyet éterrel kimossuk, a vizes fázist szilárd cítromsavval semlegesítjük, majd kloroformmal kivonatoljuk. A kloroformos oldatot vízzel mossuk, nátrium-szulfáton szárítjuk és bepároljuk. A maradékot éterrel eldörzsöljük, szűrjük, éterrel mossuk és szárítjuk. 5,8 g (71%) védett arginint kapunk (Rf 0,5—0,6) fehér amorf por formában, melyet feloldunk 50 ml tetrahidrofuránban, lehűtjük — 10 C°-ra, hozzáadunk 2,2 ml (15,6 mmól) trietilamint és 1,88 ml (14,3 mmól) klórszénsav-izobutilésztert. 10 perc keverés után újabb 2,2 ml (15,7 mmól) trietilamint adunk a reakcióelegyhez, és a keverést egy órán át folytatjuk. Ezután a keletkezett szuszpenziót szűrjük, a csapadékot tetrahidrifuránnal mossuk, majd a tetrahidrofurános oldatokat egyesítés után 20 ml-re töményítjük vákuumban. Az oldatot vízzel hígítjuk, a kivált anyagot szűrjük, vízzel mossuk és szárítjuk. A száraz kristályos terméket éterrel is mossuk, majd szárítjuk. 4,15 g (75%) cím szerinti terméket kapunk. Op.: 162—164 C°; R,1 0,8—0,9. 3. lépés: benziloxikarbonil-D-fenilalanil-L-propil-NG -benziloxikarbonil-L-argininaldehid 25 1,67 g (2,5 mmól) védett tripeptid-laktámot (1. példa, 2. lépés) feloldunk 25 ml vízmentes tetrahidrofuránban, és —20 C°-on, keverés közben hozzáadunk 4,76 ml tetrahidrofurános lítium-alumínium-hidrid-oldatot (0,4 mmól/ml töménységű oldat). 5 perc után a redukciós 30 elegyet 2 n sósavval pH 3-ra savanyítjuk, 10 ml vízzel hígítjuk, és a tetrahidrofuránt vákuumban ledesztilláljuk. A maradék vizes oldatot etil-acetáttal kivonatoljuk, az etilacetátos oldatot egyszer vízzel mossuk, majd nátrium-szulfáton szárítjuk, bepároljuk, és a maradékot 35 éterrel eldörzsöljük. 1,2 g (75%) cím szerinti védett tripeptid-aldehidet kapunk. Rf 0,58—0,65. 4. lépés: D-fenilalanil-L-prolil-L-argininaldehid-acetát 40 0,8 g (1,2 mmól) védett tripeptid-laktámot (1. példa, 3. lépés) feloldunk 15 ml metanolban, hozzáadunk 0,62 ml dietilamint, és csontszenes palládium katalizátor jelenlétében hidrogénezzük tíz percen keresztül. Ezután 45 a katalizátort kiszűrjük, mossuk 0,6 ml ecetsavat tartalmazó 5 ml metanollal, majd metanollal. A metanolos oldatokat egyesítés után bepároljuk, a maradékot éterrel eldörzsöljük, szűrjük, éterrel és acetonnal mossuk, végül szárítjuk. 0,5 g (80%) végterméket kapunk. Rt 3 0,34— 50 0,40. 2. példa 55 D-Fenilalanil-L-valil-L-argininaldehid-acetát előállítása padékot kiszűrjük, éterrel mossuk és szárítjuk (K\ 0,1— 0,15), majd 10 ml dimetilformamidban feloldjuk, és 0 C°-ra hűtve hozzáadunk 1,2 ml (8,5 mmól) trietilamint, és az alábbi vegyes anhidridhez adjuk. 5 3,2 g (8 mmól) benziloxikarbonil-D-fenilalanil-L-prolint [E. Nicolaides és munkatársai: J. Med. Chem. 11. 74 (1968)] feloldunk 10 ml dimetilformamidban, és — 10 C°-on hozzáadunk 0,9 ml (8 mmól) N-metil-morfolint és 1,06 ml (8 mmól) klórszénsav-izobutilésztert. 10 A reakcióelegyet 10 perc keverés után —10 C°-on egyesítjük a fenti dimetilformamidos oldattal. Éjszakán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd bepároljuk, és a maradékot 100 ml benzolban és 50 ml vízben feloldjuk. A vizes fázist elválasztjuk, a benzolos részt 15 mossuk 1% N-metil-morfolint tartalmazó vízzel, majd vízzel, ezután nátrium-szulfáton megszárítjuk, és bepároljuk. A maradékot di-izopropil-éterrel eldörzsöljük, szűrjük, di-izopropil-éterrel mossuk és szárítjuk. 3,5 g (68%) cím szerinti védett tripeptid-laktámot kapunk. 20 Op.: 84—86 C°, RJ° 0,25—0,35. 3. lépés: benziloxikarbonil-D-fenilalanil-L-propil-NG -benziloxikarbonil-L-argininaldehid 25 1,67 g (2,5 mmól) védett tripeptid-laktámot (1. példa, 2. lépés) feloldunk 25 ml vízmentes tetrahidrofuránban, és —20 C°-on, keverés közben hozzáadunk 4,76 ml tetrahidrofurános lítium-alumínium-hidrid-oldatot (0,4 mmól/ml töménységű oldat). 5 perc után a redukciós 30 elegyet 2 n sósavval pH 3-ra savanyítjuk, 10 ml vízzel hígítjuk, és a tetrahidrofuránt vákuumban ledesztilláljuk. A maradék vizes oldatot etil-acetáttal kivonatoljuk, az etilacetátos oldatot egyszer vízzel mossuk, majd nátrium-szulfáton szárítjuk, bepároljuk, és a maradékot 35 éterrel eldörzsöljük. 1,2 g (75%) cím szerinti védett tripeptid-aldehidet kapunk. Rf 0,58—0,65. 4. lépés: D-fenilalanil-L-prolil-L-argininaldehid-acetát 40 0,8 g (1,2 mmól) védett tripeptid-laktámot (1. példa, 3. lépés) feloldunk 15 ml metanolban, hozzáadunk 0,62 ml dietilamint, és csontszenes palládium katalizátor jelenlétében hidrogénezzük tíz percen keresztül. Ezután 45 a katalizátort kiszűrjük, mossuk 0,6 ml ecetsavat tartalmazó 5 ml metanollal, majd metanollal. A metanolos oldatokat egyesítés után bepároljuk, a maradékot éterrel eldörzsöljük, szűrjük, éterrel és acetonnal mossuk, végül szárítjuk. 0,5 g (80%) végterméket kapunk. Rt 3 0,34— 50 0,40. 2. példa 55 D-Fenilalanil-L-valil-L-argininaldehid-acetát előállítása A találmány szerinti eljárás foganatosítására az alábbi kiviteli példákat adjuk meg: Példák: A példákban a rétegkromatográfiához (Kieselgel G Stahl szerint, Reanal, Budapest) használt alábbi oldószerelegyeket az Rf kitevőjében jelöljük: 1. etilacetát-piridin-ecetsav-víz — 240: 20: 6: 11 2. etilacetát-piridin-ecetsav-víz — 60: 20: 6 : 11 3. etilacetát-piridin-ecetsav-víz — 30: 20: 6: 11 4. etilacetát-piridin-ecetsav-víz — 20: 20: 6: 11 5. n-butanol-etilacetát-ecetsav-víz — 1:1:1:1 6. n-butanol-ecetsav-víz — 4:1:1 7. kloroform-víz-etanol — 60: 15 : 50 8. kloroform-metanol — 8:2 9. kloroform-metanol — 9:1 10. kloroform-aceton — 9:1 2. lépés: benziloxikarbonil-D-fenilalanil-L-propil-NG -benziloxikarbonil-L-arginin-laktám 3,0 g (7,7 mmól) terc-butiloxikarbonil-NG -benziloxikarbonil-L-arginin-laktámot (1. példa, 1. lépés) leöntünk 10 ml 1 n jégecetes sósav-oldattal. 20 perc után a keletkezett oldatot 70 ml éterrel hígítjuk, a kivált csa-1. lépés: terc-butiloxikarbonil-L-valil-NG -benziloxikarbonil-L-arginin-laktám 1,6 g (4,1 mmól) terc-butiloxikarbonil-NG -benziloxikarbonil-L-arginin-laktámot (1. példa, 1. lépés) az 1. példa 2. lépésében leírt módon kezelünk 6,5 ml 1 n jégecetes sósav-oldattal. A kapott vegyületet feloldjuk 5 ml dimetilformamidban, hozzáadunk 0 C-on 0,6 ml P 0 0 a 1 f 10 / e á é c 15 n v ( 20 ( 25 é t r 30 e 1 j r 35 é t 40 ( j 45 ; i ( 50 I 55 60 65 3
