169870. lajstromszámú szabadalom • Eljárás véralvadást gátló oligopeptid-származékok előállítására

169870 4 Megállapítottuk, hogy az Ip

általános képletű vegyületek elsősorban a fibrinogén-fibrin átalakulását gátolják, míg az Iv

általános képletű vegyületek a trombin keletkezését is gátolják. Az I általános képletű vegyületek véralvadást gátló hatása jelentősen felülmúlja az 5 általánosan elfogadott standard vegyület, a tozil-L-arginin-metilészter és az ismert oligopeptid-inhibitorok, például a fent említett glicil-L-propil-L-arginin és az L-fenil-alanil-L-valil-L-arginin-metilészter hatását. Az olyan I általános képletű vegyületek pedig, amelyekben 10 az N-terminális aminosav-rész D-konfigurációban van, felülmúlják vagy megközelítik a hirudin és heparin véralvadást gátló hatását. A két utóbbi vegyület a trombinnak, illetve a protrombinnak közismert nagymolekulájú inhibitora. 15 A találmány eljárás az I általános képletű — ahol Y jelentése formil- vagy hidroxi-metil-csoport, X jelentése hidrogénatom, rövid szénláncú alkanoil-, fenil-(rövid szénláncú)-alkanoil-, egy gyűrűt tártai- 20 mázó aroil- vagy rövid szénláncú alkoxi-karbonilcsoport, A jelentése glicin-csoport, vagy oldalláncában rövid szénláncú alkil-csoportot tartalmazó alfa-aminosav-csoport, mely kívánt esetben rövid szénláncú 25 alkil-merkapto-csoportot tartalmaz, vagy fenil-(rövidszénláncú)-alkil-alfa-aminosav-csoport, melyek L- vagy D-konfigurációjúak lehetnek, B jelentése L-prolin- vagy L-valin-csoport — oligopeptidek és azok savaddíciós sói előállítására, 30 amely abban áll, hogy valamely Nw-védett L-arginin-laktámot a peptidkémiában ismert módon a) amino-terminálison lehasítható védőcsoporttal védett dipeptiddel kondenzáljuk, majd az így kapott védett oligopeptid-laktámot védett Oligopeptid- 35 aldehiddé redukáljuk, a védőcsoportokat eltávolítjuk, kívánt esetben az oligopeptid-aldehidet oligopeptid-alkohollá redukáljuk, majd kívánt esetben a kapott oligopeptid-származékot acilezzük és/vagy savaddíciós sóvá alakítjuk, vagy 40 b) amino-terminálison lehasítható védőcsoporttal védett rendre következő aminosavakkal kondenzáljuk, majd az így kapott védett oligopeptid-laktámot védett oligopeptid-aldehiddé redukáljuk, a védőcsoportokat eltávolítjuk, kívánt esetben az oligopeptid-aldehidet oligopeptid-alkohollá redukáljuk, majd kívánt esetben a kapott oligopeptidszármazékot acilezzük és/vagy savaddíciós sóvá alakítjuk. Az I általános képletű vegyületeket a találmány értelmében előnyösen úgy állítjuk elő, hogy alfa-amino-csoportján szabad, guanidin-csoportján védett, előnyösen benziloxikarbonil- vagy p-nitro-benzikarbonil-csoporttal védett arginin-laktámot reagáltatunk a rendre következő védett aminosavval vagy dipeptiddel. Az Ip általános képletű vegyületek előnyös szintézisénél védett dipeptidet kapcsolunk arginin-laktámhoz, míg az Iv

általános képletű vegyületek előnyös szintézisénél a rendre következő aminosavakat egymás után kapcsoljuk. A kapcsolási reakciók után kapott védett tripeptid-laktámot lítium-alumínium-hidriddel redukáljuk, a C-terminálison keletkezett aldehid-csoportot kívánt esetben szemikarbazon-formában védjük, majd előbb az alfa-amino- és guanidin-csoport védő szubsztituenseit, azután az aldehid védőcsoportját távolítjuk el és végül a terméket kívánt esetben acilezzük és/vagy savaddíciós só formában izoláljuk. Az olyan I általános képletű vegyületeket, melyekben Y jelentése hidroxi-metil-csoport; olyan módon állítjuk elő, hogy az aldehid-csoportot ismert módon redukáljuk. A találmány szerinti I általános képletű vegyületeknek a vérplazma trombinnal kiváltott alvadására gyakorolt gátló hatását az alábbi táblázatban mutatjuk be. A vegyületek hatékonyságát a relatív alvadási időkkel jellemezzük. Ez utóbbi az inhibitor jelenlétében, illetve távollétében mért alvadási idők hányadosa. Az alvadási idők meghatározásához használt reakcióelegy: 0,2 ml vérplazma, ehhez adjuk előbb az inhibitor vegyületet, majd 1 NIH egység („Minimum Requirements of Dried Thrombin" 2 nd rev. Div. Biol. Cont. Natl. Inst. Health, Bethesda, Maryland, 1946.) trombint 0,1—0,1 ml veronál pufferben (pH 7,4) oldva. A táblázatban — összehasonlítás céljára — feltüntettük a hirudinnal és heparinnal kapott relatív alvadási időket is. /. táblázat Relatív alvadási idők vegyüíet/reakcióelegy Vegyület 0,1 0,2 0,5 1,0 2, 5,0 10,0 20,0 Gly—Pro—Arg—H 1,4 1,9 Bz—L—Phe—Val—Arg—H 1,6 2,4 D—Ala—Pro—Arg—H 9,0 14,0 24,0 D—Phe—Val—Arg—H 3,0 6,2 28,0 Ac—D—Phe—Pro—Arg—H 2,0 6,7 14,0 Bz—D—Ale* —Pro—Arg—H 1,4 3,9 12,4 Boc—D—Met—Pro—Arg—H 2,7 4,6 10,0 19,0 D—Phe—Pro—Arg—H 3,8 9,0 30,0 HIRUDIN 2,0 2,6 4,6 8,0 16,0 HEPARIN 4,0 13,0 * Ale = allo-izoleucin 2