169838. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a chinosporin-S és chinosporin-C új antibiotikumok előállítására 169839 Eljárás nagytisztaságú 7-szín-benziloximetil-norborn-2-én -5-on- üzemi előállítására
169838 Biológiai tulajdonságok: a). Baktérium-spektrum: Chinosporin—S koncentráció, [xg/ml Vizsgált mikroorganizmus 1000 300 100 30 10 3 1 Candida albicans Pseudomonas fluorescens — — — — — — — Proteus vulgaris — — — — — — — Escherichia coli + + — — — — — Serratia marcescehs + + — — — — — Klebsiella pneumoniae + + — — — — — Brucella bronchiseptica + + + — — — — Staphylococcus aureus Wood + + + — — — — Bacillus subtilis + + + + — — — Bacillus megaterium „2" (jó spórázó) + + + — — -— Bacillus megaterium OKI 0101 (gyenge spórázó) + + + + + + + Jelmagyarázat: + - gátlás — : nincs gátlás tartalmaz — Vizes oldatból oldható Ca-sók hatására fehér csapadék alakjában kiválik. A további vizsgálatok azt mutatták, hogy a chino- 25 sporin-S szinergista hatást fejt ki G-penicillinnel és sztreptomicinnel egyes baktérium-tenyészetekre. így G-penicillinnel mérsékelt szinergizmust mutat Klebsiella pneumoniaevel szemben és sztreptomicinnel mérsékelt szinergizmust E. colival és Serratia marcescens- 30 szel, erős szinergizmust Brucella bronchisepticaval szemben. Akut toxicitás: DL50 patkányon: 69 mg/kg i. v. Azonosítás: A vegyület UV. és IR. spektrumát mellékeljük (1. az 1. és 2. ábrát). 35 Kromatográfiás és autobiográfiás vizsgálat: n-Butanol-ecetsav-víz (10: 2: 1) keverékkel végzett papírkromatográfia (felszálló), majd a kromatogram autobiográfiás vizsgálata azt mutatta, hogy egyetlen antibiotikus hatású anyag van jelen, amelynek Rf értéke 0,18. 40 2. A másik antibiotikum, amelyet chinosporin-C -nek neveztünk el, a fermentlé megsavanyítása után oldatban marad. A savval derített fermentléből aktív szénnel vagy kationitokkal köthető meg gyengén lúgos oldatból. Az eluálás gyengén savanyú vizes vagy vizes- 45 szerves poláros oldószerekkel történhet, előnyösen savanyú vizes metanollal. Az eluátumot 30 C°-ot meg nem haladó hőmérsékleten bepároljuk az eredeti térfogat 2—3%-ára, az esetleg kivált csapadékot szűréssel eltávolítjuk és a tiszta oldathoz 3—5-szörös térfogat 50 acetont adunk. A folyadék két fázisra válik szét. Az alsó fázishoz 5—10 térfogatnyi vízmentes etanolt adunk, mire az antibiotikum csapadék formájában kiválik. Ezt szobahőmérsékleten, vákuumban szárítjuk meg. A kapott anyag sárgásfehér amorf por, higroszkópos. Víz- 55 ben igen jól, dioxánban mérsékelten, metanolban, etanolban, acetonban és dimetilformamidban kevéssé oldódik. Olvadáspont: olvadás nélkül bomlik. A készítmény nem tiszta: a hatóanyag mellett szerves és szervetlen szennyezéseket is tartalmaz. Ezért mennyiségét 60 a továbbiakban nem súlyban, hanem hatás-egységben adjuk meg. Definíciónk szerint 1 E. az a chinosporin-C mennyiség, amely 1 ml vízben oldva agarlemezen még éppen gátolja az E. coli teszt-organizmust. A leírt készítmény általában mg-onként 300—400 E.-t, a leg- 65 tisztább eddig előállított, különlegesen tisztított készítmény 4500 E.-t tartalmaz. Miután a chinosporin-C-t mindeddig nem sikerült kellő tisztaságban előállítani, kémiai természetéről keveset tudunk. Ezért elsősorban biológiai hatása révén jellemezhető és azonosítható. UV abszorpciós spektrumát a 3. ábra szemlélteti. Baktériumspektrum: Vizsgált mikroorganizmusok Legkisebb gátló koncentráció, Hg/ml Serratia marcescens »160 Alcaligenes faecalis »160 Bacillus anthracis »160 Staphylococcus aureus Wood »160 Klebsiella pneumoniae 120 Brucella bronchiseptica 30 Proteus vulgaris 30 Salmonella typhimurium 4 E. coli 1 Pseudomonas fluorescens OKI 173001 1 Bacillus megaterium „2" (jól spórázó) 120 Bacillus megaterium OKI 0101 (rosszul spórázó) 1 Akut toxicitás egéren: 500 mg/kg i. v. és 5000 mg/kg (a fentebb leírt készítményből) per os nem toxikus. Az antibiotikus hatás jellege: A chinosporin-C jellemző tulajdonsága, hogy antibiotikus hatása a p-aminobenzoesav és az ún. „peptonfaktor" kompetitív gátlásán alapszik. Számos olyan antibiotikumot írtak le, amely antimetabolit jelleggel bír, de a fent nevezett két anyag kompetitív antagonistáival az antibiotikumok irodalmában nem találkoztunk. Ebben a tekintetben a chinosporin-C a szulfonamid-vegyületekhez hasonlít, amelyek ugyancsak a p-aminobenzoesav és a „pepton faktor" kompetitív antagonistái. A chinosporin-C azonban a szulfonamid-vegyületeknél sokkal hatásosabb, amint azt az alábbi táblázat mutatja: 2
