169831. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 6-amino-penicillánsav előállítására benzil-penicillinből vagy fenoxi-metil penicillinből vízben oldhatatlan enzim komplexxel
169831 10 I. táblázat (folyt.) Kísérlet P q A gyanta típusa és funkciós csoportjai fenol-formaldehid-S03 H Sztirol—S03 H sztirol—P03 H 2 sztirol—CH2 —N(CH 2 —COOH)2 metakrilát—GOOH akrilát—COOH akrilát—COOH akrilát—COOH + <2 >—COOH + (2) —COOH fenol/OH -formaldehid^ metakrilát^ \COOH /COOH^ vS03H A gyanta neve Bio—Rex 40 Bio—Rad AG/MP/50 Bio—Rex 63 Chelex 100 Amberlite IRC—50 Amberlite IRC—72 Amberlite IRC—84 Zerolit 236 Lewatit CNP—80 Lewatit CNP Zerolit 216 Zeokarb 227 A gyanta fizikai állapota gél makroporózus szilárd anyag gél gél makroporózus szilád anyag makroporózus szilárd anyag gél gél makroporózus szilárd anyag makroporózus szilárd anyag gél gél Az enzim-gyanta specifikus aktivitása optimális pH-nál [xM/perc/g nedves súly 4,01 9,9 7,16 37,0 ca. 8,0 7,0 ca. 8,0 15,2 25,9 fiM/perc/g száraz súly 8,3 . 19,8 30,1(4) 88,8 ca. 24,0(1) 13,9 ca. 17,1<'> 36,5 57,0 Jelmagyarázat 1. Az eredmények igen változók, a feltüntetett értékek több meghatározás átlagértékei. 2. A polimer szerkezete nem ismeretes. 3. A gyanta kereskedelmi forgalomban nem kapható. 4. A szitaméret 100—200, ill. 14,50 a többi gyantánál. Az a—c gyanták erősen anionosak, a d—f gyanták gyengén anionosak, a g—1 gyanták erősen kationosak, míg az o—u gyanták gyengén kationosak. 2—5. példák Ezek a példák azt szemléltetik, hogy az aciláz enzim tisztaságának változása miként befolyásolja az adszorpciót. Az eljárás azonos az 1. példa szerinti eljárással. Az enzimet 5,7 pH értéken adszorbeáltatjuk, az enzimgyanta komplexet 3,3%-os glutáraldehid-oldattal kezeljük. A kísérlethez Amberlite IRC—50 típusú gyantát használunk, melyet előzetesen lúggal, majd savval mosunk. Az így kapott enzim komplexek specifikus aktivitását a II. táblázatban közöljük. A II. táblázat adatai azt mutatják, hogy a vizsgált tartományban a kiindulási enzim tisztaságának növekedése az enzim komplex specifikus aktivitásának növekedésével jár. 40 45 50 55 60 65 //. táblázat Példa A kiindulási enzim specifikus aktivitása [xM/perc/mg protein. A reagáltatott enzim aktivitása pM /perc/gramm gyanta Az enzim-gyanta kornplex specifikus aktivitása H,M/perc/g nedves súly 2 3 4 5 4,64 7,87 20,5 18,2 216 463 1160 586 38,1 72,0 124,0 109,0 6—15. példák Ezekben a példákban azt mutatjuk be, hogy az enzim adszorbeáltatásakor beállított pH milyen befolyást gyakorol az enzim komplex specifikus aktivitására A kísérleteket az alábbi két sorozatban végeztük: a) Öt mintában 50 g Amberlite IRC—50 típusú gyanta pH-ját 4,9, 5,1, 5,3, 5,5 és 5,7 értékre állítjuk be. A gyantát megszárítjuk, és részben tisztított penicillin-aciláz 95 ml térfogatú oldatához adjuk. Az enzim aktivitása 60,9 [jiM/perc/ml, 16,8 mg protein/ml, az oldat vezetőképessége 0,55 m/Ohm, az oldat végső térfogata felhígítás után 200 ml. 16 óra adszorpció után, -5
