169799. lajstromszámú szabadalom • Eljárás akuleacin antibiotikumok előállítására
5 169799 6 hőmérséklet olyan határok között változhat, amelyen a mikroorganizmus szaporodik; ez előnyösen 25— 28 C°. A tenyésztés ideje általában 70—90 óra, és ha a táptalajon az antibiotikum termelése eléri a legnagyobb szintet, akkor a tenyésztést természetesen befejezhetjük. A fentiek szerint tenyésztett táptalajban az akuleacinok micéliumban halmozódnak fel. Az akuleacinok a csészepróba-módszerrel vagy a papírkorongos vizsgálati módszerrel vizsgálhatók meg, teszt-organizmusként Candida albicans-t vagy Trichophyton asteroides-t használva. Az akuleacinok előnyösen és hatásosan izolálhatok a micéliumból. Előnyösen az egész fermentlevet dobszűrő, szűrőprés vagy szeparátor segítségével leszűrjük, így kapjuk az akuleacint tartalmazó micéliumot. A nedvesmicéliumot vízzel elegyedő szerves oldószerrel, így alkohollal és acetonnal extraháljuk, az extraktumban levő oldószert lepároljuk, a maradékot vízzel hígítjuk, majd n-butanollal vagy etilacetáttal extraháljuk és az extraktumot vízzel mossuk és csökkentett nyomáson koncentráljuk, így olajos anyagot kapunk. Az olajos anyagot abszorpciós vagy megoszlási kromatográfiával tisztíthatjuk, aktív alumíniumoxidot, kovasavgélt vagy hasonlókat alkalmazva. Az akuleacinok fizikai-kémiai tulajdonságai a következők : 10 15 20 25 30 1. Elemanalízis: c% H% N°/„ Akuleacin—A 56,38, 8,01, 9,29; Akuleacin—B 60,52, 8,54, 9,46 35 Akuleacin—C 59,04, 8,27, 9,66 Akuleacin—D 57,95, 8,02, 8,83 Akuleacin—E 57,46, 8,01, 9,11 Akuleacin—F 54,81, 7,59, 9,04; Akuleacin—G 56,08, 7,73, 8,68. 40 2. Molekulasúly: Rast-módszer Aminosav analízis* 45 Akuleacin—A 1021 869; Akuleacin—B 1145 -1206 540; » Akuleacin—C 1133 -1199 540; Akuleacin—D 1209 -1284 555; 50 Akuleacin—E 1195 -1270 560; Akuleacin—F 1227 -1287 565; Akuleacin—G 1255 -1330 710. * A megállapított treonin-mennyiségből számítva 55 4. Olvadáspont: Akuleacin—A 164--167 C° (összeesik); Akuleacin—B: 148--151 C° (összeesik); Akuleacin—C 164--168 C° (összeesik); Akuleacin—D 159--162 C° (összeesik); Akuleacin—E: 186--191 C° (összeesik); Akuleacin—F: 163--167 C° (összeesik); Akuleacin—G : 166--170 C° (összeesik.) Egyik komponensnek sincs tiszta olvadáspontja. 5. Fajlagos forgatóképesség: [a]" (C = 1,0, metanol) Akuleacin-A * —53°; Akuleacin-B —45°; Akuleacin-C —47,5°; Akuleacin-D : —46°; Akuleacin-E —66°; Akuleacin-F —55°; Akuleacin-G : —52°. 3. A molekula összegképlete: [aß3 (C= 0,53, metanol) 6. Ultraibolya abszorpciós spektrum: 1. ábra: Akuleacin—A metanolban (324 ppm/ml), 2. ábra: Akuleacin—A metanolban (32,4 ppm/ml), 3. ábra: Akuleacin—A 0,01 n KOH — 9% metanolban (162 ppm/ml), 4. ábra: Akuleacin—A 0,01 n KOH — 90% metanolban (16,2 ppm/ml), 6. ábra: Akuleacin—B metanolban (40 és 400 ppm/ml), 7. ábra: Akuleacin—B 0,01 n KOH — 90% metanolban (36 és 360 ppm/ml), 8. ábra: Akuleacin—C metanolban (40 és 400 ppm/ml), 10. ábra: Akuleacin—D metanolban (40 és 400 ppm/ml), 12. ábra: Akuleacin—E metanolban (40 és 400 ppm/ml), 14. ábra: Akuleacin—F metanolban (40 és 400 ppm/ml), 16. ábra: Akuleacin—G metanolban (40 és 400 ppm/ml), 9. ábra: Akuleacin—C 0,01 n KOH — 90% metanolban (40 és 400 ppm/ml), 11. ábra: Akuleacin—D 0,01 n KOH — 90% metanolban (40 és 400 ppm/ml), 13. ábra: Akuleacin—E 0,01 n KOH — 90% metanolban (40 és 400 ppm/ml), 15. ábra: Akuleacin—F 0,01 n KOH — 90% metanolban (40 és 400 ppm/ml), 17. ábra: Akuleacin—G 0,01 n KOH — 90% metanolban (40 és 400 ppm/ml). Akuleacin—B: Akuleacin—C: Akuleacin—D: Akuleacin—E: Akuleacin—F: Akuleacin—G: Q8-61 H9 , Qe- 59 H. 104 N8 0 15 __ 16 ; Í6-17' 92-100 Na O H 58-62 "96-106 Ns O o1; N8 0 2! O, 19-20' Q7-6I H94 ^io4 N 8 ^-56-59 H90-£-58-62 "94-106 ^"8 '-'22-23' 60 Ahogy az 1., 2., 6., 8., 10., 12., 14. és 16. ábrákból látható, minden komponensnek metanolban maximuma 277 my. és válla 226 és 283 mfj. körül van. 65 Az Ej °cm értékeket mutatja be a következő táblázat mindegyik komponensre. 3
