169745. lajstromszámú szabadalom • A vese káros elváltozásainak kimutatására alkalmas, jelzett aprotinint tartalmazó diagnosztikum és eljárás annak előállítására
3 A hatóanyag jelzését előnyösen 99m Tc-izotóppal végezzük el. Eljárásunk szerint a jelzéshez valamely alkálifémpertechnekátot [99m Tc], előnyösen nátriumpertechnekátot [99m Tc] vagy káliumpertechnekátot-[99m Tc] alkalmazhatunk. E technekát-sókkal a jelzést reduktív körülmények között végezzük el. A reduktív körülményeket kémiai redukálószerekkel vagy elektronikus úton biztosíthatjuk. Kémiai redukálószerként előnyösen sztannokloridot vagy aszkorbinsavat alkalmazhatunk. A pertechnekát redukcióját elektrolitikus úton is elvégezhetjük. A vizes aprotinin-oldatot vizes vagy 0,5— 1%-os nátriumklorid-oldattal készült alkálifémpertechnekát 99m Tc] oldattal elegyítjük, majd megsavanyítás (előnyösen kb. pH = 3,4 értékre, célszerűen sósavval) után elektrolizáljuk. Az elektrolízishez előnyösen cirkónium-anódot és platina- vagy cirkónium-katódot alkalmazhatunk. Az elektrolízist 50—150 raA, előnyösen 100 mA körüli áramerősség mellett végezhetjük el. Az oldat semlegesítés után felhasználásra kész. A semlegesítést alkálifémhidroxidokkal, alkálifémkarbonátokkal, vagy alkálifémhidrogénkarbonátokkal végezhetjük el. A jelzésre felhasznált technecium izotópot generátorból nyerjük; a 99lnTc a "Mo egyetlen 6 órás felezési idejű leányeleme. A mesterséges radionuklid generátor olyan egyszerű kémiai (rendszerint kromatográfiás ioncserélő oszlop) berendezés, amelyben az adszorbeált anyaelem radioaktív bomlásából radioaktív leányelemet nyerünk. Bármely alkalmas, a gyakorlatban használatos generátort, pl. a Radiochemical Centre Amersham (London), Isocommare (NDK) vagy MTA Izotóp Intézet generátorát alkalmazhatjuk. Az eluálás során (fiziológiás konyhasó-oldattal vagy savval) nátriumpertechnekátot [99m Tc] t99m Tc0 4 Na] kapunk. A radioaktív 99m Te-izotópot előnyösen a generátorból nyert friss eluátum formájában alkalmazhatjuk aprotinin jelzésére. A felhasznált eluátum — elpnyösen alkálifémpertechfléR9fk[99m Tc] aktivitása magas, kb. 1—10 mCi/ml. Ez igen kedvező, minthogy a fenti viszonylag nagy radioaktivitás (a jóddal jelzett és biztonságosan alkalmazható aprotinin radioaktivitásának kb. 100-szorosa) a hatóanyag útjáról és funkciójáról a szervezetben igen sok információt szolgáltat. A találmányunk szerinti eljárással előállított diagnosztikumot önmagukban ismert módszerekkel formulázhatjuk. Előnyösen parenterális adagolásra alkalmas készítmények állíthatók elő. Különösen előnyös kikészítési forma az injekciós-oldat (különösen pH = 6—8 értéknek megfelelő izotóniás injekció-oidat) és a porampulla. Eljárásunk különösen előnyös kiviteli alakja szerint ún. „Kit"-et (készletet) készítünk el előre. E célból az aprotinin vizes oldatát vizes sztannoklorid oldattal összekeverjük; ez utóbbi a sztannoklorid oldhatóságának elősegítése céljából különbözős komponenseket, előnyösen nátriumcitrátot, nátriumhidrogénfoszfátot (pH =6—8 érték beállításához) és dexífrózt vagy nátriumkloridot (az izotonjásoldat kialakítására szükséges komponensként) tartalmaz. A vizes oldatot liofilizálva gumidugós üvegben vagy porampullábah hónapokig eltartható liofilizátumot kapunk. Felhasználás előtt az aprotinin kívánt fajlagos aktivitásának megfelelő aktivitású alkálifémpertechnekát [99m Tc]-oldatot adunk a liofilizátumhoz. 4 Az ily módon jelzett injekciós készítményt humán felhasználás előtt célszerűen szűrjük. A szűrést előnyösen baktériumszűrőn, különösen előnyösen Millipore szűrőn végezhetjük el, azonban bármily ilyen célokra alkalmas 5 szűrőt alkalmazhatunk. A fenti kikészítési forma előnye, hogy a kórházak számára könnyen elkészíthető és hónapokig biztonságosan tárolható liofilizátumot biztosít, mely felhasználás előtt a generátorból frissen eluált izotóppal egyszerű módon 10 felhasználásra kész injekciós készítménnyé alakítható. A diagnosztikum hatóanyagtartalma előnyösen mintegy 10% és mintegy 95% közötti érték. A találmányunk szerinti eljárással előállított radioaktív technéciummal jelzett aprotinin kitűnő vese-15 szcintigráfiás diagnosztikum. Patkányoknak intravénásán beadva csaknem szelektíven a vesékben dúsul fel a készítmény. Beadás után kb. 30 perc múlva a vesékről éles és kontraszt-dús Angerkamerás felvételek készíthetők. 20 A találmányunk szerinti eljárással előállított készítmény az ismert jelzett aprotinin-preparátumokhoz viszonyítva jelentős előnyökkel rendelkezik. A sugárterhelés lényegesen, 1—2 nagyságrenddel kisebb a 131 I-dal jelzett aprotininénél. A technecium beépülése közel 25 100%-os, tehát tisztítás nélkül közvetlenül felhasználható készítményt állítunk élő. A készítményből iiagy radioaktivitás-mennyiség (1—5 mCi) adható be humán vizsgálatoknál -—, kis sugárterhelés mellett — és ezáltal a szervezetben lejátszódó kóros elváltozások jobban fel-30 ismerhetők. Á készítmény nem toxikus. További előnye, hogy a vesében több órán át tartózkodik és így a vizsgálat kényelmesen elvégezhető. Találmányunk további részleteit a példákban ismertetjük anélkül, hogy találmányunkat a példákra korlá-35 tozriánk. ' 1. példa 40 0,5 ml aprotinin (50 mg) és 0,1 ml szíahnoklorid törzsoldat elegyét gumidugós üvegben liofilizáljuk. A sztannoklorid törzsoldat összetétele (liofilizálás előtt, az cfldat 1 összsúlyára számítva) a következő: • 45 Nátriumcitrát , . . . 3% NaH2 P0 4 ! 0,015% Dextróz, ,..-.„.- 0,2% ^ . SnCl2 -2H 2 Ö 0,2% ! ' 50 A liofilizátum hónapokig tárolható. Felhasználás előtt 4 ml 0,9%-os nátriumklorid-oldattal eluált mintegy 2mCi aktivitású nátriümpertechnekát[99m Tc] eluátumot adunk a lionlizátiirnhoz, majd 5 percen át rázogatjuk. Ez alatt az idő alattsa radioaktív 55 technecium közel 100%-os hatásfokkal beépül a polipep.,, tidanyagba.! .^-.j ,,;,. ,.• •..,;•„/, Az injekciós pldat kötött aktivitásának ellenőrzése a következőképpen történik: az oldatból mintegy 0,05 fril-t • szilikagél-G leniezekre viszünk fel. A kifejlesztést ace-60 tonnái végezzük el. A kötött aktivitást jéfeníő jelzett ' anyag ebben az 'oldószerben nem vándorol és ái kiindulási ponton marad (Rf = 0), míg a kötetlen nátrijimpertechnekát [99m Tc) a fronttal vándorol (Rf = l). A vizsgálat elvégzését a diagnosztatikumokra _ előírt 65 rendelkezések teszik szükségessé,,melyek szerint a. s,za-
