169664. lajstromszámú szabadalom • Eljárás aszimmetriás nyílt szénláncú cisztin-tartalmú peptidek előállítására
5 169664 6 zékával kondenzáljuk, mely vegyületekben a merkaptocsoport szabad és kívánt esetben az egyéb védőcsoportokat ismert módon lehasítjuk. Az eljárás előnye, hogy a tritil- vagy acilamidometilcsoporttal védett cisztein-peptidek vagy azok 5 származékai szelektíven cisztin-peptiddé alakíthatók anélkül, hogy előzőleg a merkapto-védőcsoportot le kellene hasítani és nem képződnek zavaró melléktermékek, például savak. A fentiekben ismertetett eljárás során nincs 10 szükség arra, hogy az —SCOOR3 -csoportot közvetlenül a második cisztein-komponenssel megvalósított reakció előtt vigyük be az első (S-butil vagy S-acilamido-metilcsoporttal szubsztituált) cisztein-komponensbe. Ezt a csoportot a szokásos védőcsoportokhoz 15 hasonlóan a peptidszintézis valamelyik korábbi lépésében vihetjük be a leírt reakcióval ezekbe a cisztein-származékokba és a kapott származékot további peptidfelépítő eljáráslépésekhez használhatjuk. Az —SCOOR3 -csoporttal védett cisztein-vegyületet a 20 szintézis bármely tetszőleges időpontjában reagáltathatjuk valamely szabad merkaptocsoporttal rendelkező ciszteinnel, vagy cisztein-vegyülettel. Az aminocsoportok szabad vagy védett alakban lehetnek jelen mind a szulfenilhalogeniddel, mind a 25 második peptid-komponenssel való reakciónál; különleges védelem azonban nem szükséges. Amino-védőcsoportokként példaképpen megnevezzük a benzil-,trifluor-metil, ftaloil-, p-toluolszulfonil-, tritilcsoportot vagy mindenekelőtt a szénsavból 30 származó csoportokat, így az aromás gyökben adott esetben halogénatomokkal, rövidszénláncú alkil-, rövidszénláncú alkoxi- vagy rövidszénláncú alkoxi-karbonilcsoporttal szubsztituált benzil-oxi-karbonil-csoportokat, „színes" benzil-oxi-karbonil-csoportokat, 35 így p-fenilazo-benzil-oxi-karbonil- és p-ifp'-metoxi-fenil azo/-benzil-oxi-karbonil-csoportot, toliloxikarbonil-, 2-fenil-izopropil-oxi-karbonil-, 2-tolil-izopropiloxi-karbonü-csoportot és mindenekelőtt a 2-p-/bifenilil/-2-propiloxi-karbonil-csoportot (1554 051 számú 40 francia szabadalmi leírás), továbbá az alifás oxi-karbonil-csoportokat, így például az allil-oxi-karbonil-, ciklopentil-oxi-karbonil-, terc-amüoxi-karbonil-, adamantiloxi-karbonil- és elsősorban a terc-butiloxi-karbonilcsoportot. 45 A két reakciót megvalósíthatjuk akkor is, ha az aminocsoportok sók, például hidrokloridok alakjában vannak jelen. A karboxilcsoportok például amidálással vagy észterezéssel lehetnek védve. Észterként megnevezzük 50 például a metanollal, etanollal, benzil-alkohollal, p-metoxi-benzil-alkohollal, 2,4,5-triklór-fenöMal, N-hidroxi-szukcinimiddel, N-hidroxi-ftálimiddel vagy mindenekelőtt a terc-butanollal vagy valamely szilanollal, például trimetil-szilanollal képezett észtere- 55 ket. A hidroxilcsoportok, például a szerin- vagy tirozingyökök hidroxilcsoportjai például éterezéssel, így benzil-alkohollal vagy előnyösen terc-butanollal végzett éterezéssel lehetnek védve. Az arginingyükökben a guanidinocsoport például tozilcsoporttal lehet 60 védve. A találmány szerinti eljárással kapott, védőcsoportokkal rendelkező diszulfid-peptideket közvetlenül felhasználhatjuk hosszabb aminosavláncú peptidek szintézisére vagy a védőcsoportokat kívánt esetben ismert módon, például savakkal lehasítjuk. 65 A reakciót megvalósíthatjuk akkor is, ha a karboxilcsoportok sók alakjában vannak jelen, például alkálifémekkel, ammóniával vagy szerves nitrogénbázisokkal, például etanol-aminnal, dietil-aminnal, trietil-aminnal, tributil-aminnal, piridinnel, pirrolidínnel alkotott sók alakjában. A szulfenil-tiokarbonát-származék előállításakor például az alábbi oldószereket alkalmazhatjuk: szénhidrogének, így petroléter, hexán, benzol, toluol, klórozott szénhidrogének, így metilénklorid, kloroform, diklóretán, alkoholok, így metanol, etanol, éterek, így dietil-éter és tetrahidrofurán, amidok, így dimetil-formamid. Nincs szükség arra, hogy a reakció során keletkező halogénhidrogén megkötésére valamely akceptort, például trietil-amint adagoljunk, akkor azonban kívánatos lehet, ha savakkal szemben nagyon labilis csoportok vannak a peptidszármazékban. A reakció körülbelül —40°C és +60°C közötti hőmérsékleteken megy végbe, előnyösen azonban 0 C°-on valósítjuk meg. A szulfenil-tiokarbonát-származék és a tibl-komponens reakciójakor a fentiekben említett oldószereken kívül jégecetet, valamint vizes ecetsavat is alkalmazhatunk. A reakciót megvalósíthatjuk a megadott hőmérsékleteken, előnyösen szobahőmérsékleten. A találmány szerinti eljárás foganatosítására az alábbi kiviteli példákat adjuk meg. Az Rf értékek szilikagél-íemezen végzett vékonyréteg kromatográfiás vizsgálatok eredményei: 100 rendszer = etil-acetát-n-butanol-piridin-jégecetvíz (42:21:21:6:10). A példákban az alábbi rövidítéseket alkalmaztuk: OMe = metilésztercsoport, OtBu = terc-butilészter-csoport, OSu = N-hidroxiszukcinimidészter-csoport, BOC = terc-butiloxikarbonil-csoport TrT = tritücsoport, Bpoc = 2-(p-bifenilil)-2-propiloxikarbonil-csoport, Acm = acetamidometilcsoport, SCM = metoxikarbonilszulfenil (-S-CO-OCH3) csoport DCHA = diciklohexil-ammóniumsó A példák védett inzulin-freagmensek előállítását mutatják A20 és B 19 közötti diszulfidhíd tartományában. . 1. példa BOC-Cys-Asn-OtBu I BOC-Val-CyS-Gly-Glu(OtBu)2 1. BOC-Cys(SCM)-Asn-OtBu a) BOC-Cys(Trt)-Asn-OtBu-ból aa) változat: 700 mg Cl-S-CO-OCH3 -hoz 2 ml kloroformban 0 C°-on hozzáadunk 3,2 g BOC-Cys(Trt)-Asn-OtBU-t 15 ml kloroformban és 5 ml metanolban. 45 perc múlva 0 C°-on hozzáadunk 150 ml kloroformot és az oldatot vízzel extraháljuk. A nátriumszulfát felett szárított oldatot vízsugárszivattyúval előállított vákuumban bepároljuk. Az eközben leváló olajszerű anyag BOC-Cys(SCM)-Asn— OtBu és trifenilmetil-metüéter elegye. Ez utóbbit nem kell elválasztani, minthogy a következő reakcióban nem ad mellékreakciókat. 3
