169664. lajstromszámú szabadalom • Eljárás aszimmetriás nyílt szénláncú cisztin-tartalmú peptidek előállítására
169664 7 8 bb) változat: 634 g BOC-Cys(Trt)-Asn-OtBu-t 6 ml kloroformban és 3 ml metanolban 0 C°-on összekeverünk, 0,18 ml Cl-S-CO-OCH3-mal. Egy órán át 0 C°-on állni hagyjuk, majd hozzáadunk 2,5 ml n dietilamin-oldatot és híg citromsav-oldattal és vízzel mossuk. A szerves fázist nátrium-szulfát felett szárítjuk, majd bepároljuk és petroléterrel összekeverjük. A BOC-Cys(SCM)-Asn-OtBu csapadékot kloroform-petroléter elegyből kristályosítjuk. Olvadáspont: 102-104 °C. Kitermelés: 0,465 g. b) BOC-Cys(Trt)-OH.DCHA-ból 5,37 g BOC-Cys(Trt)-OH-dietil-ammóniumsóhoz 35 ml kloroformban és 9 ml metanolban hozzáadunk 4,2 ml trietil-amint, az oldatot 0 C°-ra hűtjük és összekeverjük 3,5 ml Cl—S—CO—OCH3-mal. Égy órán át 0 C -on állni hagyjuk, majd az oldatot híg citromsav-oldattal és vízzel mossuk, a szerves fázist nátrium-szulfát felett szárítjuk és bepároljuk. A keletkező olajszerű anyagot kétszer eldörzsöljük petroléterrel, feloldjuk 10 ml éterben és összekeverjük 2,5 ml diciklohexil-aminnal. 145—146 °C olvadáspontú kristályokat kapunk. Kitermelés: 4,8 g. 725 mg BOC-Cys(SCM)-OH.DCHA-t 30 ml kloroformban összekeverünk híg citromsav-oldattal és vízzel, a szerves fázist elválasztjuk, nátrium-szulfát felett szárítjuk és olajszerű anyaggá pároljuk. Ezt 10 ml etil-acetátban felvesszük és 0 C°-on összekeverjük 190 mg H—Asn-OtBu-val és 226 mg diciklohexil-karbodiimiddel. 15 órán át 5 C°-on állni hagyjuk, majd leszűrjük, a szűrletet 30 ml etil-acetáttal fehígítjuk és az oldatot híg citromsav-oldattal, 05 n nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal és vízzel mossuk. Az etil-acetátos oldatot nátrium-szulfát felett szárítjuk és az oldószert lepároljuk. Kloroform-petroléter elegyéből végzett átkristályosítás után a bb) változatban leírt terméket kapjuk. c) BOC-Cys(Acm)-Asn-OtBu-ból 700 mg Cl-S-CO-OCH3 -t és 2,32 g BOC-Cys(Acm)—Asn—OtBu-t az a) példában ismertetett módon reagáltatunk és hasonlóképpen feldolgozzuk. 2,4 g vékonyréteg kromatográfiásan tiszta BOC-Cys(SCM)-Asn-OtBu-t kapunk. Rf = 0,4 kloroformmetanol 9:1 elegyben. A kiindulási anyagot az alábbi módon állíthatjuk elő. 585 mg BOC-Cys(Acm)-OH-t és 377 mg H-Asn-OtBu-t 10 ml etil-acetátban és 5 ml dimetil-formamidban 0 C°-n összekeverünk 452 mg diciklohexilkarbodiimiddel és 24 órán keresztül ezen a hőmérsékleten reagáltatjuk. Ezután leszűrjük, a szűrletet szárazra pároljuk, a maradékot etil-acetátban felvesszük és n citromsav-oldattal n nátrium-hidrogénkarbonát-oldattal és vízzel mossuk. A szerves fázist nátrium-szulfáttal szárítjuk és bepároljuk. Etil-acetátból és n-hexánból kristályosítva BOC-Cys(Acm)— Asn-OtBu-t kapunk 97-100 ° C olvadásponttal. BOC-Cys-Asn-OtBu BOC-Val-Cys-Gly-Glu(OtBu)2 1,45 g BOC-Cys(SCM)-Asn-OtBu-t és 1,85 g BOC-Val-Cys-Gly-Glu(OtBu)2 -t feloldunk 30 ml 1:1 arányú kloroform-metanol-elegyben és 45 percen keresztül szobahőmérsékleten tartjuk. Ezután az oldatot vízsugárszivattyúval előállított vákuumban 35 C°-on bepároljuk és a keletkező habszerű anyagot kétszer 5 ml petroléterrel eldörzsöljük. 3,0 g vékonyréteg-kromatográfiásán tiszta fenti képletű terméket kapunk színtelen por alakjában. Rf = 0,47 kloroform-5 metanol 9:1 elegyben. A kiindulási anyagként alkalmazott BOC-Val-Cys-Gly-Glu(OtBu)2 -t az alábbi módon állíthatjuk elő. 1,72 g BOC-Val-Cys(Trt)-Gly-Glu(OtBu)2 -hoz 10 20 ml etil-acetátban és 10 ml metanolban hozzáadunk 700 mg higany(II)-acetátot és az elegyet 3 órán keresztül szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Ezután a tiszta oldaton 15 percen keresztül hidrogén-szulfid áramot vezetünk keresztül, a kivált higany-szulfidot 15 kiszűrjük és a szűrletet bepároljuk. A keletkező habszerű anyag BOC-Val-Cys-Gly-Glu(OtBu)2 -bői (Rf = 0,55 kloroform-metanol 1:1 elegyben) és trifenil-metil-metiléterből áll. Ez utóbbi nem zavarja a következő reakciót. 20 2. példa H-Cys-Asn-OtBu | .HCl BOC-Cys-Gly-Glu(OtBu)2 1. H-Cys(SCM)-Asn-OtBu.HCl a) H-Cys(Trt)-Asn-OtBu.HCl-ből 670 mg Cl-S-CO-OCH3 -hoz 10 ml metanolban 0 C°-on hozzáadunk 1,82 g H-Cys(Trt)-Asn-OtBu-30 HCl-t 15 ml metanolban. Az elegyet 45 percen át 0 C°-on állni hagyjuk, majd a terméket 250 ml éterrel lecsapjuk, dekantáljuk és a maradékot vízsugárszivattyúval előállított vákuumban 35 C°-on szárítjuk. 1,2 g vékonyréteg kromatográfiásan tiszta H-Cys 35 (SCM)-Asn-OtBu.HCl-t kapunk sárgásszínű por alakjában. Rf = 0,32 kloroform-metanol 8:2 elegyben. A kiindulási anyagot az alábbi módon állíthatjuk elő. 7,76 g Trt-Cys(Trt)-Asn-OtBu-t 60 ml jégecet-40 ben és 15 ml vízben egy órán keresztül szobahőmérsékleten állni hagyunk. Ezután hozzáadunk 45 ml vizet, a kivált trifenil-karbinolt kiszűrjük és a szűrletet 40 C°-on és 0,01 torr nyomáson bepároljuk. A maradékot 200 ml etil-acetátban felvesszük és az 45 oldatot n nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal és vízzel extraháljuk. Az etil-acetátos fázist nátrium-szulfát felett szárítjuk, vízsugárszivattyúval előállított vákuumban körülbelül 30 ml térfogatra bepároljuk. 10 ml n sósavval etil-acetátban összekeverjük, majd 50 teljesen szárazra bepároljuk. 5,7 g vékonyréteg kromatográfiásan tiszta H—Cys(Trt)—Asn—OtBu. HCL-t kapunk, Rf = 0,55 kloroform-metanol 8:2 elegyben, b) H-Cys(Acm)-Asn-OtBu.HCl-ből 1,6 g H-Cys(Acm)-Asn-OtBu.HCl-ből és 790 mg 55 Cl-S-CO-OCH3 -ból az a) pontban ismertetett módon 1,5 g H-Cys(SCM)-Asn-OtBu.HCl-t kapunk. A kiindulási anyagot az alábbi módon állíthatjuk elő. 60 a ) Trt-Cys-(Acm)-OH 2,3 g H-Cys(Acm)-OH és 2,8 ml trietil-amin 50 ml dimetil-formamiddal készített oldatához 4,2 g tritil-kloridot adunk 20 ml dimetil-formamidban és 24 órán keresztül szobahőmérsékleten keverjük. Ez-65 után körülbelül 10 ml térfogatra bepároljuk, 100 ml 4
