169437. lajstromszámú szabadalom • Eljárás szedatív hatású peptidek előállítására
17 169437 18 H-Met-Glu-His-D-Phe-NH-(CH2 ) S -NH 2 -acetát H-Ala-Glu-His-D-Phe-NH-(CH2) S -NH 2 -acetát H-Val-Glu-His-D-Phe-NH<CH2) 5 -NH 2 -acetát H-ß-Ala-Glu-His-D-Phe-NH-(CH2) S -NH 2 -acetát Rf x = 0,24 Rfx = 0,20 Rfx =0,23 Rf x =0,19 xR f Bu : Py : Ac : víz rendszerben [4 : 3/4 : 1/4 : 1], szilíciumdioxidon. 8. példa A-Glu-His-D-Phe-Lys-Phe-OH-acetát [ahol A jelentése H-Met, H(a-Me)Ala, H-Gly, Dam vagy H-0-Ala] a) Z-D-Phe-Lys(Boc)-Phe-OBzl 9,68 g H-Lys(Boc)-Phe-OBzl-t feloldunk 50 ml dimetilformamidban, majd hozzáadunk 9,6 g (22,8 mól) Z-D-Phe-ONP-t. Az elegyet 24 órán át 20 C°on keverjük, majd az oldószert vákuumban ledesztilláljuk és a maradékot etilacetátban felvesszük. Ezt a fázist egymást követően 0,1 n sósavval, vízzel, 5%-os nátriumhidrogénkarbonát-oldattal és újra vízzel mossuk, majd szárítjuk és vákuumban bepároljuk. A keletkező maradékot etilacetát-petroléter elegyből átkristályosítjuk. Rf Bz : EtOH rendszerben (8:2) = 0,70, szilíciumdioxidon. b) Z-D-Phe-Lys(Boc)-Phe-OMe 4,24 g H-Lys(Boc)-Phe-OMe-t feloldunk 25 ml dimetilformamidban, majd hozzáadunk 4,77 g Z-D-Phe-ONP-t. Az elegyet az a) lépésben leírt módon dolgozzuk fel. Rf Bz : EtOH (8:2) = 0,75, szilíciumdioxidon. c) Z-D-Phe-Lys(Boc)-Phe-NH2 A szerves fázist egymást követően 0, In sósavval, vízzel, 5%-os nátriumhidrogénkarbonát-oldattal és vízzel mossuk, majd az etilacetátos fázist szárítjuk és vákuumban ledesztilláljuk. A maradékot 5 azonnal feldolgozzuk további konverzióban. e) Z-Védőcsoport eltávolítása Az a), b), c) vagy d) lépésben kapott tripeptid-10 -származék 5 g-ját feloldjuk 50 ml metanolban, majd hozzáadunk 0,5 g, 10% palládiumot tartalmazó aktív szenet. Ezután 4 órán át hidrogéngázt buborékoltatunk át az elegyeny majd a katalizátort leszűrjük. A szűrletet bepároljuk és a maradékot 15 azonnal feldolgozzuk. így eljárva az alábbi peptid-származékokat kapjuk: Peptid 20 H-D-Phe-Lys(Boc)-Phe-OH H-D-Phe-Lys(Boc)-Phe-OMe 25 H-D-Phe-Lys(Boc)-Phe-NH2 H-D-Phe-Lys(Boc)-Phe-OC!, H2 3 A b) lépésben kapott észter 500 mg-ját metanolban feloldjuk. Az oldatot 0C°-ra hűtjük, majd 50 ammóniával telítjük. Ezután 24 órán át keverjük, majd a keletkező csapadékot leszűrjük és azonnal feldolgozzuk. d) Z-D-Phe-Lys(Boc)-Phe-OCnH23 55 Az a) lépésben kapott észter elszappanosítása útján nyert Z-D-Phe-Lys(Boc)-Phe-OH 3 g-ját 45 ml dimetilformamidban feloldjuk, majd hozzáadunk 1,1 egyenérték undecilbromidot és 1,1 egyenérték 60 diciklohexilamint. Az elegyet 2 napon át szobahőmérsékleten keverjük, majd a szuszpenziót 0C -ra hűtjük. Ezután a csapadékot leszűrjük. A szűrletet szárazra páróljuk és a maradékot vizes etilacetában felvesszük. 65 Rf To : EtOH rendszerben (8 : 2), szilíciumdioxidon 0,23 0,37 0,26 0,41 30 35 40 45 f) Boc-(a-Me)-Ala-Glu(OtBu)-His-D-Phe-Lys(Boc)-Phe-OH 0,96 g Boc-(a-Me)-Äla-Glu(OtBu)-His-N 2 H 3 -et 3 ml, tetrahidrofuránnal készült 1 n sósavoldat segítségével és 0,13 ml izoamilnitrittel ismert módon aziddá alakítunk. Ezt az azidot hozzáadjuk 1 mmól H-D-Phe-Lys(Boc)-Phe-OH 10 ml lehűtött dimetilformamiddal készített oldatához, majd a pH-t N-etilmorfolinnal 6,9-re beállítjuk. Az elegyet 70 órán át 0 C -on állni hagyjuk, majd a csapadékot leszűrjük, és a dimetilformamidos oldatot (szűrlet) cseppenként beadagoljuk 10-szeres mennyiségű vízbe. 2 órán át tartó keverés után a keletkező csapadékot leszűrjük. Kitermelés: 1,2 g. Rf Bu : Py : Ac : víz rendszerben [4:3: 4:1/4:1] = 0,53, szilíciumdioxidon. g) Az f) lépés szerinti módon eljárva az alábbi védett peptideket kapjuk: Boc-Gly-Glu(OtBu)-His-D-Phe-Lys(Boc> -Phe-OH, Boc-Met-Glu(OtBu)-His-D-Phe-Lys(Boc)-Phe-OH, Dam-Glu(OtBu)-His-D-Phé-Lys(Boc> -Phe-OH, Boc-(3-Ala-Glu(OtBu)-His-D-Phe-Lys(Boc)-Phe-OH, Boc-Met-Glu(OtBu)-His-D-Phe-Lys(Boc)-Phe-OMe, Boc-Met-Glu(OtBu)-His-D-Phe-Lys(Boc)-Phe-NH2 , Boc-Mét-Glu(OtBu)-His-D-Phe-Lys(Boc)-Phe-OCnHjj, Boc-Met-Gln-His-D-Phe-Lys(Boc)-Phe-OH. 9
