169437. lajstromszámú szabadalom • Eljárás szedatív hatású peptidek előállítására
19 169437 20 h) Védőcsoportok eltávolítása c) H-Met-Glu-His-D-Phé-Lys-Tra-acetát Az f) és g) lépésekben kapott peptideket a lg b)lépés szerint előállított peptidet az fentiekben ismert módon 90%-os TFA-val végzett 1. a) példa szerinti módon megfosztunk a védőkezeléssel a megfelelő trifluoracetátokká alakítva, 5 csoportoktól és acetáttá alakítunk. majd a trifluoracetátcsoportot acetátcsoportra cserélve az alábbi peptid-acetátokat kapjuk: V H-(a-Me)-Ala-Glu-His-D-Phe-Lys-Phe-OH-acetát 0,16 H-Gly-Glu-His-D-Phe^Lys-Phe-OH-acetát 0,14 H-Met-Glu-His-D-Phe-Lys-Phe-OH-acetát 0,17 Dam-Glu-His-D-Phe-Lys-Phe-OH-acetát 0,23 H-0-Ala-Glu-His-D-Phe-Lys-Phe-OH-acetát 0,18 H-Met-Glu-His-D-Phe-Lys-Phe-OMe-acetát 0,26 H-Met-Glu-His-D-Phe-Lys-Phe-NHj-acetát 0,23 H-Met-Glu-His-D-Phe-Lys-Phe-OC!, H2 3 -acetát 0,29 H-Met-Gln-His-D-Phe-Lys-Phe-OH-acetát 0,24 xR f Bu : Py : Ac : víz rendszerben [4 : 3/4 :1/4 :1], szilíciumdioxidon. 9. példa A-Glu-His-D-Phe-Lys-Tra-acetát [ahol A jelentése H-Met, H-Met(-K)) vagy H-Met(-K)2 )] a) H-D-Phe-Lys(Boc)-Tra Kitermelés liofilizálás után: 0,6 g. Rf Bu : Py : Ac : víz rendszerben [2 : 3/4 : : 1/4 : 1] = 0,35, szilíciumdioxidon. 10 d) Oxidáció A 2. a) és 2. b) példa szerinti módon hidrogénperoxiddal végzett oxidáció a metionin-szulfoxid analógot, illetve a szulfon-származékot adja. 15 20 25 szulfoxid-származék acetátja szulfon-származék acetátja 3,19 g, Z-D-Phe-ONP-ból és H-Lys(Boc)-Tra-ből kapott Z-D-Phe-Lys(Boc)-Tra-t metanolban hidrogénezünk a 8. e) példa szerinti módon. Rf Bu : Ac : víz rendszerben (4:1 :1) = 0,76, szilíciumdioxidon. 45 b) Boc-Met-Glu(OtBu)-His-D-Phe-Lys(Boc)-Tra 1,5 g Boc-Met-Glu(OtBu)-His-N2 H 3 -ot 3,84 ml, 50 tetrahidrofuránnal készült 2,51 n sósavoldat segítségével és 0,44 ml izoamilnitrittel a fentiekben ismertetett módon aziddá alakítunk. 1,36 ml trielilamin és 1,48 g, 20 ml dimetilformamid és 0,32 ml trietilamin elegyében oldott 55 H-D-Phe-Lys(Boc)-Tra hozzáadása után a pH-t 7,7-re állítjuk be. Az elegyet 70 órán át keverjük 0 C -on, majd szűrjük és a dimetilformamidot vákuumban ledesztilláljuk. Az olajszerű maradékot vizes etilacetátban felvesszük és vízzel, 4% nátrium- 60 kloridot tartalmazó vízzel, 0,1 n sósavval és újra 4% nátriumkloridot tartalmazó vízzel mossuk. Szárítás után az etilacetátot körülbelül 45 ml térfogat eléréséig lepároljuk, csapadékot kapunk. Kitermelés: 55%. 65 Rf x = 0,27 Rf x = 0,29 xR f Bu : Py : Ac : víz- rendszerben [4 : 3/4 : 1/4 : 1], szilíciumdioxidon. 10. példa H-Met-Glu-His-D-Phe-Arg-Tra-acetát A 9. példa szerinti módon eljárva aziddá alakítjuk a Boc-Met-Glu(OtBu)-His-N2 H 3 -ot, majd 30 H-D-Phe-Arg-Tra-dal kapcsoljuk, így a Boc-Met-Glu(OtBu)-His-D-Phe-Arg-Tra védett peptidet kapjuk. Ezt a peptidet a fentiekben ismertetett módon trifluorecetsawal kezeljük, majd a peptid trifluor-35 acetát-sóját acetáttá alakítjuk. Rf Bu : Py : Ac : víz rendszerben [4 : 3/4 : : 1/4 : 1] = 0,18, szilíciumdioxidon. 40 ii. példa A-Glu-His-D-Phe-Lys-R-acetát [ahol A jelentése H-Met, H-Met(->0), H-Met(-*02 ), Dam, Dam(->0) vagy Dam(-és R jelentése PEA, PPA vagy Amf] a) Z-D-Phe-Lys(Boc)-PPA >02 ) 6,39 g, a megfelelő Z-Lys(Boc)-PPA (olvadáspont: 78-79 C°) hidrogénezésével kapott H-Lys(Boc)-PPA 6,39g-jának 70 ml dimetilformamiddal készített oldatához 7,61 g Z-D-Phe-ONP-t adunk. A világos sárga színű oldatot éjszakán át szobahőmérsékleten keverjük, majd a dimetilformamidot vákuumban ledesztilláljuk. A maradékot etilacetátban feloldjuk és ezt az oldatot 5%-os káliumkarbonát-oldattal, vízzel 0,1 n sósavval és vízzel mossuk. A szerves fázist szárítjuk, ezután az etilacetátot ledesztilláljuk és a maradékot meleg etilacetátból kristályosítjuk. Kitermelés: 11,4 g. Rf Bz : EtOH rendszerben (8:2) = 0,68, szilíciumdioxidon. i 10
