169402. lajstromszámú szabadalom • Eljárás cefem-karbonsav-származékok előállítására

27 169402 28 mól TAG és 80 millimól N-[(7-amino-4-metoxi-metilkarbonil-3-cefem-3-il)-metil]-piridinium-klorid 10 ml 0,5 mólos citrát-foszfát-pufferrel készült oldatát adjuk. A reakcióelegyet ezután keverés közben 4 órán át 37 G -on tartjuk, amikor is a polarimetriás kvantitatív meghatározás tanúsága szerint a reakcióelegyben 21 millimól N-/[7-(2'-tienil-acetamid o )-4-metoxi-metilkarbonil-3-cefem-3-il]-metil/-piridinium-klorid képződik és akkumulálódik. 20. példa Escherichia coli (IFO-13502) 1. példában ismertetett módon előállított tenyészetéből elkülönített és mosott sejteket 2 ml 0,2 mólos foszfát-pufferben olyan mennyiségben szuszpendálunk, hogy a kapott sejtszuszpenzióban a sejtkoncentráció az eredeti fermentlé sejtkoncentrációjának a hússzorosa legyen, majd a szuszpenzióhoz hozzáadjuk 160 millimól 7-ADCA-metil-szulfonil-etilészter és 320 millimól 0-(p-hidroxi-fenil-acetil)-glikolsav 2 ml 0,2 mólos foszfát-pufferrel készült oldatát. A reakcióelegyet ezt követően állandó keverés közben 16 órán át 37 C -on tartjuk, majd a képződött termékből és a reagálatlan 7-ADCA-észterből a megfelelő szabad savakat 25 C -on (10-es pH-értéken) 180 millimól nátrium-hidroxid beadagolása útján felszabadítjuk. A reakcióelegyet ezután az 1. referenciapéldában ismertetett módon Aerobacter cloaceae (IFO-12937) által termelt ß-laktamázzal kezeljük, majd a képződött termék mennyiségét spektrofotometriásán meghatározzuk. A vizsgálat tanúsága szerint a reakcióelegyben 118 millimól 7-(p-hidroxi-fenil-acetamido)-3-dezacetoxi-cefalosporánsav-metil-szulfonil-etilészter akkumulálódik. 21. példa A 20. példában ismertetett módon járunk el, de Escherichia coli (IFO-13 502) mosott sejtjei helyett Proteus rettgeri (ATCC-9250) mosott sejtjeit használjuk. így a reakcióelegyben 9 millimól 7 - (p -hidroxi-fenil-acetamido)-3-dezacetoxi-cefalosporánsav-metil-szulfonil-etilészter akkumulálódik. 22. példa Bacillus sp. (ATCC-14552) 5. példában ismertetett módon előállított tenyészetéből 20 ml-hez 164 mg fenil-ecetsav-etilészter 2,5 ml metanollal és 178 mg 7-amino-3-dezacetoxi-cefalosporánsav-metü-szulfonil-etilészter 2,5 ml 0,5 mólos foszfát-pufferrel (pH-ja 8,0) készült oldatát adjuk. A reakcióelegy pH-értékét ezután 5 n nátrium-hidroxid-oldattal 8,5-re beállítjuk, majd a reakcióelegyet állandó keverés közben 24 órán át 37 C -ön tartjuk. A reakcióelegyben a (3-laktamáz alkalmazásával kombinált spektrofotometriás meghatározás tanúsága szerint így 12,3 millimól 7-fenil-acetamido-3-dezacetoxi-cefalosporánsav-metil-szulfonil-etilészter akkumulálódik. 23. példa Escherichia coli (IFO-13502) 1. példában ismertetett módon előállított tenyészetéből elkülö-5 nített és mosott sejteket 5 ml 0,5 mólos foszfát-pufferben olyan mennyiségben szuszpendálunk, hogy a kapott sejtszuszpenzióban a sejtkoncentráció az eredeti fermentlé sejtkoncentrációjának a hússzorosa legyen, majd a szuszpenzióhoz hozzáad-10 juk 160 millimól fenil-acetamid és 80 millimól 7-amino-3-dezacetoxi-cefalosporánsav-metil-szulfonil-etilészter 5 ml 0,5 mólos foszfát-pufferrel (pH-ja 8,0) készült oldatát. A reakcióelegyet ezután 24 órán át 37 C -on tartjuk, amikor is a reakció-15 elegyben a polarimetriás vizsgálat tanúsága szerint 22,5 millimól 7-fenil-acetamido-3-dezacetoxi-cefalösporánsav-metil-szulfonil-etilészter akkumulálódik. 20 24. példa Proteus rettgeri (ATCC-9250) 6. példában ismertetett módon előállított tenyészetének 40ml-éből a sejteket centrifugálás útján elkülönít-25 jük, majd 2 ml 0,2 mólos citrát-pufferben (pH-ja 6,0) szuszpendáljuk. A kapott szuszpenzióhoz hozzáadjuk 320 millimól S-fenil-acetil-tioglikolsav és 160 millimól 7-amino-3-dezacetoxi-cefalosporánsav-metil-szulfonil-etilészter 2 ml 0,2 mólos citrát-puf-30 ferrel készült oldatát, majd a kapott reakcióelegyet állandó keverés közben 24 órán át 37 C°-on tartjuk. A reakcióelegyben így a polarimetriás meghatározás tanúsága szerinti 57 millimól 7-fenil-acetamido-3-deza cetoxi-cefalosporánsa v- met il-szulfonil-35 -etilészter akkumulálódik. 25. példa Bacillus sp. (IFO-12063) 5. példában ismerte.-40 tett módon előállított tenyészetének 20 ml-éhez 400 millimól fenil-acetil-glicin és 200 millimól 7-amino-3-dezacetoxi-c efalosporánsav-metilészter 5 ml 0,2 mólos glicin-nátrium-hidroxid-pufferrel (pH-ja 9,0) készült oldatát adjuk, majd a kapott 45 reakcióelegy pH-értékét beállítjuk 9,3-ra, és a reakcióelegyet ezt követően keverés közben 24 órán át 37 C -on tartjuk. A reakcióelegyben így a polarimetriás meghatározás tanúsága szerint 16 millimól 7-fenil-acetamido-3-dezacetoxi-cefalosporánsav-metil-50 észter akkumulálódik. Szabadalmi igénypontok: 55 1. Eljárás az I általános képletű 7-(a-helyettesített-acetamido)-3-helyettesített-cef-3-em-4-karbonsavészterek — ahol R jelentése adott esetben egy vagy több halogén-60 atommal vagy hidroxi-, tio-, nitro-, rövidszénláncú alkil-, rövidszénláncú alkoxi- vagy cianocsoporttal helyettesített telítetlen hattagú karbociklusos csoport vagy heteroatomként oxigénvagy kénatomot tartalmazó öttagú heterocik-65 - lusos csoport, 14