169364. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az FR-02A antibiotikum előállítására

5 169364 6 etil-formiáttal, metil-acetáttal, etil-acetáttal, n-butil-acetáttal, izobutil-acetáttal vagy etil-propionáttal, ketonokkal, például acetonnal, metil-etÜketonnal vagy ciklohexanonnal, vagy pedig halogénezett rövidszénláncú szénhidrogénekkel, mint kloroformmal, diklór-metánnal, 1,2-diklór-etánnal, szén-tetrakloriddal, l-klór-2,2-dimetil-propánnal, tetraklor-etilénnel vagy bromoformmal folytatjuk le. Az irodalomban már beszámoltak arról, hogy a Streptomyces lactamdurans NRRL 3802 törzs a C-cefamicin antibiotikumot termeli (Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 1972. szeptember, 2. kötet, 3. sz., ,122-131 oldal, „Cephamycins, a New Family of/T-Lactam Antibiotics", 764 160 sz. belga szabadalmi leírás). Az új FR-02A antibiotikum vízzel nem elegyedő szerves oldószerekben igen jól oldódik, míg a C-cefamicin oldhatatlan a vízzel nem elegyedő szerves oldószerekben. így ez a két termék könnyen elválasztható egymástól. Ezért, ha a fermentlevet valamely vízzel nem elegyedő oldószerrel extraháljuk, akkor az oldószeres fázisban az említett másik antibiotikumtól mentes állapotban kapjuk az új FR-02A antibiotikumot, míg a fermentlé vizes fázisából a C-cefamicin ismert módon, ugyancsak az FR-02A antibiotikumtól mentes állapotban nyerhető ki. A fermentléből elkülönített FR-02A antibiotikumot további tisztítás céljából valamely molekula-szűrőn kromatografálhatjuk, majd valamely felületaktív adszorbenssel végezhetünk további kromatográfiai tisztítást. Molekula-szűrőként például térhálós kötésű dextrán alkalmazható, ilyen célra alkalmas termékként ismeretes a Sephadex LH-20 (a Pharmacia Fine Chemicals Inc. gyártmánya). Az FR-02A eluálására valamely rövidszénláncú alkanol, például metanol alkalmazható. Felületaktív adszorbensként valamely hidrofob nem-ionos, makropórusos gyanta, például divinilbenzoUal térhálósított polisztirol, mint a Rohm and"Haas cég által forgalomba hozott Amberlite XAD típusú gyanták, XAD-1-től XAD-12-ig alkalmasak. Különösen előnyös az FR-02A antibiotikum tisztítására a XAD—2 gyanta. Az adszorbeált FR—02A antibiotikum eluálására alkalmas oldószerek példáiként rövidszénláncú alkanolok vizes oldatai, mint vizes metanol, etanol, izopropanol, butanol és hasonlók említhetők. Az FR-02A antibiotikumnak a XAD-2 gyantáról történő eluálására különösen előnyösen alkalmazható az izopropanol és víz 1:1 arányú elegye. Az FR-02A antibiotikumot termelő Streptomyces lactamdurans törzs már eddig is ismeretes volt, ez a törzs MA-2908 sz. alatt szerepel a Merck et. Co., Inc., Rah way, New Jersey kultúra-gyűjteményében. Ezt a törzset egy talajmintából különítettük el és a Northern Utilization Research and Development Division, Agricultural Research Service, U. S. Department of Agriculture (ezelőtt: Northern Regional Research Laboratories), Peoria, Minois, nyilvánosan hozzáférhető gyűjteményében deponáltuk NRRL 3802 nyilvántartási szám alatt. A Streptomyces lactamdurans mikroorganizmus teljes taxonómiai és morfológiai leírását a 764 160 sz. belga szabadalmi leírás tartalmazza. A taxonómiai vizsgálatok alapján a Streptomyces lactamdurans mikroorganizmust egy új Actinomyces-fajként azonosították. Ez az új faj a Streptomyces nemhez tartozik és az ismert Streptomyces fradiae species számos tulajdonságát mutatja. Biokémiailag 5 ez a két species csaknem teljesen egyezik, morfológiai szempontból azonban fontos különbségek állnak fent közöttük. így például a Streptomyces fradiae légmicéliuma tengerikagyló-rózsaszín árnyalatú, míg a Streptomyces lactamdurans légmicé-10 liuma krémszínű. Az ilyen és más jellemző különbségek alapján határozták meg ezt a mikroorganizmust új speciesként, Streptomyces lactamdurans név alatt. Az említett Streptomyces lactamdurans törzs 15 azonban csupán egy példája az FR-02A antibiotikum termelésére alkalmas törzseknek, meg kell jegyezni, hogy a találmány köre nem korlátozódik ennek a különleges törzsnek az alkalmazására. A találmány szerinti eljárás lefolytatható más olyan, 20 például Actinomyces-nemhez tartozó természetes vagy mutáció útján nyert - például mutagen behatásoknak, mint röntgensugárzásnak, ibolyántúli sugárzásnak, nitrogén-mustárok vagy más mutagen vegyi anyagok hatásának kitett kultúrákból szelek-25 tált - törzsekkel, amelyek megfelelő körülmények között az FR-02A antibiotikum termelésére képesek. Az FR-02A antibiotikum termelése tehát a Streptomyces lactamdurans NRRL 3802 mikroorga-30 nizmussal beoltott vizes tápközegben megfelelő körülmények között lefolytatott aerob fermentáció útján történik. Vizes tápközegként jól alkalmazhatók a más antibiotikumok termelésére alkalmas ismert tápközegek. Az ilyen tápközegek szénfor-35 rást, nitrogénforrást és szervetlen sókat tartalmaznak a mikroorganizmus által asszimilálható alakban. A találmány szerinti eljárás nincs valamely specifikus tápközeghez kötve, egyaránt alkalmazhatók szuszpendált tápanyagot tartalmazó tápközegek 40 vagy szuszpendált tápanyagoktól lényagileg mentes tiszta tápközegek is. A tápközegben asszimilálható szénforrásként általában szénhidrátok, mint cukrok, például dextróz, glükóz, arabinóz, maltóz, raffinóz, xilóz, 45 mannit vagy hasonlók, továbbá keményítők, mint zabliszt, rozsliszt, kukoricakeményítő és hasonlók alkalmazhatók. A szénhidrátok szükséges mennyisége függ részben a tápközegben jelenlevő egyéb tápanyagoktól is, általában azonban 1 súly% és 50 6 súly% között lehet. Az említett szénforrások egyenként vagy kombináltan is alkalmazhatók a tápközegekben. Nitrogénforrásként különféle fehérje-anyagok alkalmazhatók, mint élesztőkivonat, élesztő-hidrolizátum, primer élesztő, szójaliszt, gya-55 potmagliszt, kazein-hidrolizátumok, kukoricalekvár, cefresűrítmény, burgonyapép és hasonlók. A nitrogénforrások szintén egyenként vagy kombinációban alkalmazhatók és mennyiségük a vizes tápközegben körülbelül 0,2 súly% és 6 súly% között lehet. 60 E leírás példáiban ismertetünk különféle alkalmas tápközegeket, megjegyzendő azonban, hogy a találmány szerinti eljárás semmilyen szempontból nincs ezekre a konkrét tápközegekre korlátozva, hanem a különféle ismert tápközegek széles köre 65 egyaránt alkalmazható. 3