169364. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az FR-02A antibiotikum előállítására

3 169364 4 teljes egészében extraháljuk valamely vízzel nem • elegyedő poláris szerves oldószerrel a termelt antibiotikum kinyerése céljából. A fermentáció lefolytatható a tápanyagot szuszpendált alakban tartalmazó közegekben, vagy lényegileg tiszta, szusz- 5 pendait tápanyagoktól mentes tápoldatokban is. Ha a fermentációt szuszpendált tápanyagot tartalmazó közegben folytatjuk le, az antibiotikum mind a kapott fermentlé szilárd anyagában (amely a micéliumot és a szuszpendált tápanyagot tártai- 10 mázza), mind pedig a fermentlé folyékony fázisában megtalálható. A szilárd részből az antibiotikumot oly módon nyerjük ki, hogy a szilárd anyagot szűréssel, centrifugálással vagy más alkalmas módszerrel elkülönítjük a fermentléből, majd 15 valamely szerves oldószerrel, előnyösen valamelypoláris szerves oldószerrel extraháljuk az elkülönített szilárd anyagot. A fermentlé folyékony fázisában maradt antibiotikumot valamely vízzel nem elegyedő poláris szerves oldószerrel való extrahálás 20 útján különítjük el. Megjegyzendő, hogy ha a fermentlé feldolgozása késleltetetten történik, akkor a szilárd anyag összmennyisége csökken a fermentlében és a szilárd anyagból kinyerhető antibiotikum részaránya is kisebb lesz. 25 A szuszpendált szilárd tápanyagot nem tartalmazó közegekben az FR—02A antibiotikum túlnyomó részét a lényegileg tiszta fermentléből nyerhetjük ki. Ilyen esetekben a teljes fermentlevet extraháljuk valamely vízzel nem elegyedő poláris 30 szerves oldószerrel, például kloroformmal, az antibiotikum kinyerése céljából. Eljárhatunk azonban oly módon is, hogy a fermentleben jelenlevő kisebb mennyiségű szilárd anyagot, például a micéliumot az extrahálás előtt elkülönítjük a ferment- 35 léből. Azután az FR—02A antibiotikumnak a micéliumban levő mennyiségét ebből az elkülönített micéliumból extraháljuk valamely erre alkalmas szerves oldószerrel. Az antibiotikum előállításának és kinyerésének 40 előnyös módja az, hogy a már ismert Streptomyces lactamdurans NRRL 3802 mikroorganizmust meghatározott körülmények között valamely szuszpendált szilárd tápanyagot tartalmazó közegben vagy valamely tiszta, szuszpendált szilárd tápanyag- 45 tói lényegileg mentes tápközegben tenyésztjük, majd a kapott fermentlevet teljes egészében extraháljuk valamely vízzel nem elegyedő poláris szerves oldószerrel. Az extrakciót oly módon folytatjuk le, hogy a fermentlé pH-értékét a savas tartományba 50 állítjuk be, majd hozzáadjuk az oldószert. A fázisok összekeverése után a szilárd anyagot eltávolítjuk a fermentléből. A folyékony részt állni hagyjuk, míg az oldószer-fázis el nem különül. Ezt az oldószer-réteget azután elválasztjuk, vízzel mossuk, 55 valamely alkalmas szárítószerrel szárítjuk és vákuumban bepároljuk. A bepárlási maradékot valamely nem-poláris szerves oldószerrel, például petroléterrel vagy hexánnal mossuk és levegőn megszárítjuk, így termékként az FR-02A antibioti- 60 kumot kapjuk. Az FR-02A antibiotikum előállításának egy további előnyös módja abból áll, hogy a már ismert Streptomyces lactamdurans NRRL 3802 mikroorganizmust meghatározott körülmények között vala- 65 mely szuszpendált tápanyagot tartalmazó közegben tenyésztjük, majd a kapott fermentlevet a micéliumból és a szuszpendált tápanyagból álló szilárd rész elkülönítése céljából leszűrjük. A leszűrt lepényt levegővel - amennyire csak lehet — szárazra fúvatjuk, majd bekeverjük valamely poláris szerves oldószerbe és újból leszűrjük. A szűrőn maradt szilárd részt az oldószer további mennyiségével mossuk, a kapott mosófolyadékot egyesítjük a szűrlettel és vákuumban bepároljuk. Vizes zagyot kapunk maradékként, ennek pH-értékét savasra állítjuk, majd valamely nem-poláris szerves oldószerrel, például petroléterrel vagy hexánnal addig mossuk, míg a mosófolyadékok nem válnak színtelenné. Ezután a vizes zagyot valamely poláris szerves oldószerrel extraháljuk, az oldószeres kivonatot elkülönítjük, szárítjuk, leszűrjük és vákuumban bepároljuk, maradékként az FR-02A antibiotikumot kapjuk. A fent leírt módszerekkel az FR-02A antibiotikumot közvetlenül körülbelül 40-50%-os . tisztaságban kapjuk. Eljárhatunk továbbá oly módon is, hogy a fermentációt valamely, szuszpendált tápanyagoktól lényegileg mentes tápközegben folytatjuk le. A kapott fermentlevet a micélium elválasztása céljából leszűrjük. A micéliumot valamely poláris szerves oldószerrel extraháljuk. Az elkülönített oldószeres kivonatot szárítjuk és vákuumban szárazra pároljuk. A maradékot valamely nem-poláris szerves oldószerrel, például petroléterrel vagy hexánnal kirázzuk. A szilárd rész ülepedésének centrifugálással történő elősegítése után a szerves oldószert dekantálással eltávolítjuk. A maradékot levegőn megszárítjuk és így a kívánt FR-02A antibiotikumot kapjuk. Egy további előnyös módszer abból áll, hogy a Streptomyces lactamdurans NRRL 3802 mikroorganizmust meghatározott körülmények között valamely tápközegben tenyésztjük, a kapott fermentléből a szilárd anyagokat (micélium és esetleg szuszpendált tápanyag) elkülönítjük, és a folyékony részt szerves oldószerrel extraháljuk. A fermentlé pH-értékét savasra állítjuk és az extrakciót vízzel nem elegyedő poláris szerves oldószer hozzákeverése útján végezzük. A rétegek szétválása után a szerves oldószeres réteget elválasztjuk, valamely erre alkalmas szárítószerrel szárítjuk, majd vákuumban szárazra pároljuk. A maradékot nem-poláris szerves oldószerrel, például petroléterrel vagy hexánnal mossuk és levegőn megszárítjuk, így a kívánt FR—02A antibiotikumot kapjuk. A fentebb leírt eljárásmódokban vízzel nem elegyedő poláris szerves oldószerekként például rövidszénláncú alkánsavak alkilészterei, mint metil-formiát, etil-formiát, metil-acetát, etil-acetát, n-butil-acetát, izobutil-acetát vagy etil-propionát, továbbá ketonok, mint ciklohexanon, valamint halogénezett rövidszénláncú szénhidrogének, mint kloroform, diklór-metán, szén-tetraklorid, 1,2-diklór-etán, l-klór-2,2-dimetil-propán, tetraklór-etilén vagy bromoform alkalmazhatók. Azokat az extrakciókat, amelyeket a fentebbi ismertetés szerint poláris szerves oldószerrel végezhetünk, például rövidszénláncú alkánsavak, rövidszénláncú alkilésztereivel, mint metil-formiáttal, 2