169161. lajstromszámú szabadalom • Eljárás glükozidhidroláz inhibitorok előállítására az Actinomycetales rendbe tartozó törzsekkel
61 169161 46. példa Glükozidhidroláz-inhibitorok hatékonyságának vizsgálata patkányon és emberen Szénhidráttal való táplálás után fellépő táplálkozási hiperglikémia és hiperinzulinémia előállítása céljából 6 darab patkánynak perorálisan oldat vagy szuszpenzió alakjában 2,5 g/kg keményítőt vagy maltózt vagy szacharózt adunk (kontroll állapot). 6 másik patkánynak a fenti szénhidrátok egyikén kívül még egy glükozidhidroláz-inhibitort is beadunk a megadott adagban perorálisan. A vércukrot a szénhidrát beadagolás után rövid időszakonként határozzuk meg a vérben auto-analizátorral a retroorbitális vénaplexusból [Technicon, Hoffman szerint: J. biol. Chem. 120, 51 (1937)]. A kísérletekhez eljárással előállított használtuk fel: 5. példa szerint előállított inhibitor, aktivitása 80 AIE/mg, 14. példa szerint előállított inhibitor, aktivitása 106 AIE/g és 450 SIE/g, 37. példa szerint előállított inhibitor, aktivitása 3 x 106 AIE/g és 400 SIE/g, 10. példa szerint előállított inhibitor, aktivitása 150MIE/ml. amelynek amelynek amelynek amelynek 10 15 35 az alábbi, találmány szerinti glükozidhidroláz-inhibitorokat 50 55 62 1.táblázat Éheztetett patkányok vérglükóza mg%-ban (középérték ± standard eltérés) különböző időpontokban 5 keményítő ± 5. példa szerinti hatóanyag orális^adagolása után 15 perc 60 perc keményítő nélküli kontroll 61 ± 16 70 ± 3,4 keményítős kontroll 140 ± 11 145 ± 15 keményítő + 25 000 AIE/kg 106 ±20 128 ±11 Táplálkozási hiperglikémia embereken való előállítása céljából vizes szuszpenzió alakjában sze- 20 mélyenként 50 g keményítőt adagolunk orálisan. A vércukrot közvetlenül a kísérlet kezdete előtt és rövid időszakonként a kísérlet megkezdése után határozzuk meg a fentiekben megadott módon az ujjbegy hajszáleréből származó vérben. Egy további 25 kísérletben a keményítő szuszpenzióhoz hatóanyagot adunk. A 6—6 darab patkány szérumában, amelyek közül az egyik csoport 2,5 g keményítő/kg adagot 30 kapott perorálisan (kontrollok) és a másik csoport ezenkívül egy glükozidhidroláz-inhibitort is kapott, a szénhidrát adagolás után rövid időszakonként meghatározzuk az inzulin mennyiséget. 2. táblázat Éheztetett patkányok vérglükóza mg%-ban (középérték ± standard eltérés) különböző időpontokban keményítői 14. példa szerinti hatóanyag orális adagolása után A szérumban az inzulin meghatározást radioimmunológiai úton határozzuk meg Hales és Randié kettős antitest módszere szerint [Biochem. J. 88, 137 (1963)]. 40 A keményítő meghatározást a patkányok gyomor-bélrendszerében rövid időszakonként 300 mg keményítő/patkány orális adagolása után végezzük. Ekkor az emésztő rendszer egyes részeit az állatok leölése után kipreparáljuk, megmossuk és 45 a bennük levő emésztetlen keményítőt savas hidrolízis után glükózként határozzuk meg. keményítő nélküli kontroll keményítős kontroli keményítő + 25 000 AIE/kg 15 perc 30 perc 60 perc 72 ± 8,5 78 + 12 69 ± 12 159 ±-28 153 ±36 164 ± 7,9 95 ± 3,7 95 ± 8,7 96 ± 7,2 3. táblázat Éheztetett patkányok vérglükóza mg%-ban (középérték ± standard eltérés) különböző időpontokban keményítő ± 37. példa szerinti hatóanyag orális adagolása után P<0,01 P< 0,001 szénhidrátos kontrollal szemben 15 perc 30 perc 60 perc keményítő nélküli kontroll keményítős 60 kontroll A 14. és 37. példa szerint előállított inhibitor keményítő < mind amilázt, mind szacharázt gátol, az inhibitorok 25 000 pontos összetételét azonban nem határoztuk meg AIE/kg és nem bontottuk szét őket az egyes altípusokra. 65 72 ± 8,5 78 ±12 69 ± 12 159 ±28 153 ±36 164 ± 7,9 83 ± 6,5 105 ± 5,2 104+ 6,5 31
