169161. lajstromszámú szabadalom • Eljárás glükozidhidroláz inhibitorok előállítására az Actinomycetales rendbe tartozó törzsekkel
ciókat (összesen 300 = 6 liter) egyesítjük, rotációs bepárlóbaíi 1 liter térfogatra bepároljuk és erős keverés közben 10 liter abszolút alkoholba csepegtetjük: ekkor pelyhes, csaknem fehérszínű csapadék válik le. A csapadékot leszűrjük, abszolút alkohol- 5 lal, majd éterrel mossuk és vákuumban szárítjuk. Kitermelés: 60 g fehér por, aktivitás: 3x 106 AIE/g és 400 SIE/g. 38. példa Az inaktív kísérőanyagok fő mennyiségét, különösen a sötét színű színezőanyagokat elválaszthatjuk azonos térfogat mennyiségű metanollal való 15 lecsapással is. Ekkor 26 liter centrifugált tenyészoldatot (amelyet a 37. példa szerinti módon állítottunk elő és 0,02 térfogat% Bayer Silicon E habzásgátlót tartalmaz és aktivitása 43 000 AIE/ml) vákuumban 20 torr nyomáson és 100 C° fürdő- 20 hőmérsékleten 1,2 liter térfogatra bepárolunk. A mélyfekete oldatot összekeverjük azonos térfogatmennyiségű (1,2 liter) metanollal, ekkor pelyhes, fekete csapadék képződik. Ezt redős szűrőn szűrjük és a barna színű szűrletet (2,2 liter) 25 intenzív keverés közben becsepegtetjük 10 liter abszolút etanolba. Világosbarna színű csapadék képződik, ezt leszűrjük, acetonnal és éterrel mossuk és vákuumban szárítjuk. Kitermelés: 185 g világos okkersárga színű por, aktivitása 30 3 700 AIE/mg. További tisztítás céljából a teljes csapadékmennyiséget (185 g) feloldjuk 250 ml vízben és a sötétbarna színű oldatot 5 x 75 cm méretű Amber -lite IRA 410 oszlopra visszük fel (acetát-alak, 35 pH 7). Vízzel eluáljuk, az első 500 ml eluátumot eldobjuk, a következő 5 000 ml térfogatú csaknem színtelen eluátum tartalmazza az inhibitort. Ezt rotációs bepárlóban 200 ml térfogatra bepároljuk, 2 liter abszolút etanolba becsepegtetjük, a csapa- 40 dékot leszűrjük, etanollal és éterrel mossuk, majd vákuumban szárítjuk. Kitermelés: 80 g fehér színű por, aktivitása 8 000 AIE/mg. 45 39. példa 1 literes Erlenmeyer-lombikban levő 120 ml 4. példa szerinti táptalajt beoltunk a CBS 962 70 szám alatt deponált Actinoplanes spec. 5Q törzs előkultúrájának (amelyet a 4. példa szerinti módon állítottunk elő) 2 ml-ével és a kultúrát rázógépen 6 napon keresztül 28 C°-on inkubáljuk. A micélium elválasztása után olyan tenyészoldatot kapunk, amelynek aktivitása 30 AIE/ml és 0,15MIE/ml és 0,5 SIE/ml. A micéliumot a 20. példa szerinti módon extraháljuk, így olyan extraktumot kapunk, amelynek aktivitása 15 AIE/ml, 0,17MIE/ml és 0,5 SIE/ml. 60 40. példa A 39. példa szerinti módon járunk el, azonban az 1. példa szerinti táptalajt használjuk. így olyan 65 60 tenyészoldatot kapunk, amelynek aktivitása 60 AIE/ml, 0,16MIE/ml és 0,65 SIE/ml, valamint olyan micélium extraktumot, amelynek aktivitása 30 AIE/ml, 0,16 MIE/ml és 0,33 SIE/ml. 41. példa A CBS 963 70 szám alatt deponált Streptosporangium album törzs zabpehelyagarral készített ferde kémcsőkultúrájával beoltjuk a 39. példa szerinti táptalajt és a kultúrát 5 napon keresztül a 40. példa szerinti módon inkubáljuk. így elválasztás után a micéliumot a 21. példa szerinti módon extraháljuk, a kapott extraktum aktivitása 0,14 MIE/ml. 42. példa A CBS 964 70 szám alatt deponált Streptosporangium spec, törzs kultúrájával végezzük a fermentációt a 41. példa szerinti módon, így 0,1 MIE/ml aktivitású micélium extraktumot kapunk. 43. példa A CBS 966 70 szám alatt deponált Streptosporangium roseum törzs kultúrájával végezzük a fermentációt a 41. példa szerinti módon, így 0,05 MIE/ml aktivitású tenyészoldatot és 0,07 MIE/ml aktivitású micéliumextraktumot kapunk. 44. példa 1 literes Erlenmeyer-lombikban levő 120 ml térfogatú táptalajt, amelynek összetétele: 0,5% Bacto-pepton, 0,5% húskivonat, 0,2% élesztőextraktum, 0,03% kazein hidrolizátum, 1% inozit, 1% szorbit, 1% D-mannit, 1% glükóz, 0,1% K2 HP0 4 , 0,05% MgS04 , 0,05% KCl, 0,01% FeS04 (a pH-t 7,2-re állítottuk be) beoltjuk a CBS 965 70 szám alatt deponált Streptosporangium spec, törzs ferde agarkultúrájából (amelyet az 1. példa szerinti módon állítottunk elő), majd 7 napon keresztül rázógépen 28 C°-on inkubáljuk. így olyan tenyészoldatot kapunk, amelynek aktivitása 0,072 MIE/ml és olyan micéliumextraktumot (ezt a 21. példa szerinti módon állítjuk elő), amelynek aktivitása 0,054 MIE/ml. 45. példa A 4. példa szerinti táptalajt beoltjuk az ATCC 3319 szám alatt deponált Streptomyces flaveolus törzs zabpehelyagarral készített ferde kémcső kultúrájával és 3 napon keresztül a 4. példa szerinti módon inkubáljuk. így a micélium elválasztása után 20 AIE/ml aktivitású tenyészoldatot kapunk. 30
