169161. lajstromszámú szabadalom • Eljárás glükozidhidroláz inhibitorok előállítására az Actinomycetales rendbe tartozó törzsekkel
57 169161 58 után 500 ml térfogatú felső réteget kapunk, 33. példa amelynek aktivitása 160 AIE/ml. Az 500 ml térfogatú felső réteget keverés közben kicsapjuk hatszoros térfogatmennyiségű (3 liter) acetonnal, a világosbarna színű csapadékot leszűrjük, acetonnal és éterrel mossuk és vákuumban szárítjuk. Kitermelés: 3,5 g, 13,5 x 103 AIE/gr. A 28. példa szerinti táptalajban a glicerint glükózzal helyettesítjük, így 330 AIE/ml aktivitású tenyészoldatot kapunk. 28. példa 34. példa 10 Erlenmeyer-lombikban levő 120 ml 4. példa szerinti táptalajt beoltunk a CBS 961 70 szám alatt deponált Actinoplanes spec, törzs előkultúrájának (amelyet a 4. példa szerinti módon állítottunk elő) 1 ml-ével és a 4. példa szerinti módon inkubáljuk. 15 35. példa így 5 napos fermentáció után l,0SIE/ml aktivitású tenyészlevet kapunk. A 28. példa szerinti táptalajban a keményítőt glükózzal helyettesítjük, így 660 AIE/ml aktivitású tenyészoldatot kapunk. 29. példa A 28. példa szerinti módon járunk el, azonban az 1. példa szerinti táptalajt használjuk. így 5 napos inkubálás után olyan tenyészoldatot kapunk, amely 26 000 AIE/ml és 0,18MIE/ml és 1,8 SIE/ml aktivitású. 30. példa A 29. példa szerinti módon járunk el, a lombik tartalma azonban 200 ml, így 5 napos inkubálás után 24 500 AIE/ml és 0,18MIE/ml és 2,1 SIE/ml aktivitású tenyészoldatot kapunk. A 29. példa szerinti táptalajban az NZ-aminokat egyéb komplex nitrogénforrásokkal helyettesítjük, így 3 napos fermentáció után az alábbi amiláz-in-20 hibitor-egységeket tartalmazó tenyészoldatokat kapjuk: Pótanyag AIE/ml 25 Szójaliszt Halkivonat Tripton Húskivonat Pharmamedia 30 Megjegyzés: 13 500 16 800 25 200 32 700 23 100 a Pharmamedia gyapotmagokból előállított protein-koncentrátum (gyártja: Traders Oil Mill Company, USA). 35 31. példa A 28. példa szerinti módon járunk el, azonban a táptalaj összetétele: 2% keményítő, 1% glükóz, 0,3% glikokoll, 0,25% kukoricalekvár, 0,4% szójaliszt, 0,1% NaCl, 0,1% K2HP0 4 , 0,01% MgS0 4 , 40 961 70 szám alatt deponált Actinoplanes spec. 36. példa A 29. példa szerinti táptalajt beoltjuk a CBS 0,01% CaC03 , 0,01% FeS0 4 . így 3 napos fermentálás után 12 900 AIE/ml aktivitású tenyészoldatot kapunk. 32. példa Az 1. példa szerinti táptalajban a glükózt egyéb cukrokkal vagy cukoralkoholokkal helyettesítjük és a beoltást és inkubálást a 28. példa szerinti módon végezzük. így az alábbi amiláz-inhibitor-koncentrációjú tenyészoldatokat kapjuk: törzzsel, így 3 napos fermentáció után 51 500 AIE/ml aktivitású tenyészoldatot kapunk. Adalékanyag AIE/ml AIE/ml (1%) 3 nap múlva 5 nap múlva Nyerscukor 23 000 Laktóz 24 000 — Maltóz 23 500 — Galaktóz 31 300 — Glükóz 41000 — Szorbit 24 000 — Mannit 33 000 — Inozit 21000 — Keményítő 33 900 -45 37. példa 5 db, 8 liter 1. példa szerinti táptalajt és 0,1 térfogat% Bayer E100 jelű habzásgátlót tartalmazó kísérleti fermentort beoltunk a CBS 50 961 70 szám alatt deponált Actinoplanes spec, törzs előkultúrájának (amelyet az 1. példa szerinti módon állítottunk elő) 120—120 ml-ével és keverés és levegőztetés közben 65 órán keresztül 28 C°-on inkubáljuk, majd egyesítjük őket és a micéliumot 55 elválasztjuk. így 24 liter 13 000 AIE/ml és 6 SIE/ml aktivitású tenyészoldatot kapunk. Ezt vákuumban 20 torr nyomáson és 100 C° fürdőhőmérsékleten 1 liter térfogatra bepároljuk. A feketére színezett koncentrátumot 60 percen keresztül centrifugáljuk 60 15 000 fordulat/perc sebességgel, a sötét színű felső réteget Amberlite IRA 410 oszlopra visszük fel (átmérő: 9 cm, magasság: 50 cm, acetát-forma, pH 7 vízben), óránként 50 ml vízzel eluáljuk és 20 ml térfogatú frakciókat gyűjtünk össze. Az 65 inhibitort tartalmazó, halványsárgára szinezett frak-29
