169159. lajstromszámú szabadalom • Eljárás pszichofarmakológiailag aktív peptidek előállítására
17 169159 18 . ehhez étert adunk és keverjük, aminek hatására a termék megszilárdul. Az így kapott termék Rf -értéke (szilikagélen, az 5:3:2 arányú Am-Py-víz oldószer-rendszerben): 0,82. Hozam: 4,9 g. 5 2. H-Phe-Lys(Boc)-Trp-OH • HCl 1,85 g fenti módon kapott tripeptidet 40 ml dimetil-foimamid és 1 mólekvivalens sósav elegyében oldunk. Az oldathoz 350 mg 10%-os palládiu- io mos aktívszén-katalizátort adunk, majd 6 óra hoszszat hidrogén-gázt buborékoltatunk az elegyen keresztül. A reakció befejeztével a katalizátort kiszűrjük és a kapott szűrletet azonnal tovább dolgozzuk fel az alább leírt módon. A kapott 15 termék Rf -értéke (szilikagélen, az 5:3:2 arányú Am-Py-víz oldószer-rendszerben): 0,72. 3. Z-Phe-Lys(Boc)-Trp-NH2 vagy Z-Phe-Lys(Boc)-Trp-N(CH3 ) 2 20 25 ml metanolos 10 n ammónia-oldathoz vagy dimetilamin-oldathoz 2g nyers észtert (előállítva az 1. bekezdés első részében leírt módon) adunk. Az 25 elegyet két napig keverjük, majd szárazra pároljuk-és a maradékot metanolból átkristályosítjuk. így az ammónia kiindulási anyagként való alkalmazása esetén kapott amid Rf -értéke (szilikagélen, a 8 :2 arányú benzol-etanol oldószer-rendszerben): 0,35, 30 a dimetilamin alkalmazása esetén kapott dimetilamid Rf-értéke (ugyanilyen körülmények között): 0,43. Hozam: 85%, illetőleg 80%. 4. Z-Phe-Lys(Boc)-Trp-OCuH23 35 3,6 g Z-Phe-Lys(Boc)-Trp-OH (előállítva az 1. bekezdésben leírt módon) 45 ml dimetil-formamiddal készített oldatához 1,35 g undecil-bromidot és l.Og diciklohexil-amint adunk. Az elegyet 35 C° 40 hőmérsékleten 48 óra hosszat keverjük, majd 0 C°-ra hűtjük és ezen a hőmérsékleten további 2 óra hosszat folytatjuk a keverést. A képződött és kivált diciklohexü-ammónium-bromidot kiszűrjük és a szűrletet vákuumban szárazra pároljuk. A mára- 45 dékot etilacetátban oldjuk, az oldatot 0,1 n sósavoldattal, majd vízzel, azután vizes 10%-os nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, végül ismét vízzel mossuk. A szerves oldószeres fázist ^elkülönítjük, vízmentes nátrium-szulfáttal rövid ideig szárítjuk, 50 azután vákuumban részletesen bepároljuk és n-hexán hozzáadása útján. kikristályosítjuk az undecilésztert. A kapott termék Rf -értéke (szilikagélen, a 8 : 2 arányú benzol-etanol oldószer-rendszerben): ' 0,48. Hozam: 3,0 g. • 55 5. A fenti K.2. bekezdésben leírttal egyező módon, a 3. és 4. bekezdés szerint előállított tripeptideket hidrogénezzük és így az alább felsorolt vegyületeket kapjuk hidroklorid alakjában: , 60 H-Phe-Lys(Boc)-Trp-NH2 Rf szilikagélen: 0,76 . H-Phe-Lys(Boc)-Trp•NCCH3 ) 2 Rf szilikagélen: 0,77 65 H-Phe-Lys(Boc)-Trp-OCnH23 Rf szilikagélen: 0,80. (A fenti Rf-értékek meghatározása 5:3:2 arányú Am-Py-víz oldószer-rendszerrel történt.) L) H-Phe-Arg-Trp-OH 1. BooArg(N02 )-Trp-ONB 5,76 g Boc-Arg(N02 )-OH 70 ml dimetil-formamid és 2,52 ml trietil-amin elegyével készített oldatát -10 C° hőmérsékletre hűtjük, 2,38 ml klórhangyasav-izobutilésztert adunk hozzá és az elegyet -10 C° hőmérsékleten 10 percig keverjük. Az így kapott oldathoz 6,14 g H-Trp-ONB • HCl 40 ml lehűtött dimetil-formamiddal, 3,01 ml trietil-ámin hozzáadásával készített oldatát, adjuk. Az elegyet —10 C° hőmérsékleten 30 percig, 0 C°-on 3, óra hosszat, majd 20 C° hőmérsékleten további 20 óra hosszat keverjük. Az oldószert ezután vákuumban elpárologtatjuk és a bepárlási maradékot etilacetát és víz 10 :1 arányú elegyével felvesszük. A szerves oldószeres fázist elkülönítjük, vízzel, majd vizes 5%-os nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, végül ismét vízzel mossuk, szárítjuk és.vákuumban szárazra pároljuk. Ily módon 8,5 g olajszerű terméket kapunk, amelynek Rf-értéke (szilikagélen, 8 :2 arányú benzol-etanol oldószer-rendszerben): 0,79. 2. H-Arg(N02 )-Trp-ONB • HCl Az 1. bekezdés szerint kapott peptid 1 g-ját 20 ml diklór-metánban oldjuk és hűtés közben hidrogénklorid-gázt buborékoltatunk az oldaton keresztül. A reakcióelegyet 1 óra hosszat keverjük, majd a képződött csapadékot szűréssel elkülönítjük és vízmentes diklór-metánnal alaposan mossuk. Az így kapott szilárd terméket azonnal tovább dolgozzuk fel a következő műveleti lépésben. Hozam: 0,88 g. A kapott termék Rf-értéke (szilikagélen, az 5:3:2 arányú Am-Py-víz oldószer-rendszerben): 0,66. (A kiindulási anyag Rf-értéke: 0,93.) 3. Z-Phe-Arg(N02 )-Trp-ONB-3g fenti módon kapott dipeptidet 20 ml dimetil-formamidban . oldunk. Az oldatot 0 C° hőmérsékletre hűtjük, 1,12 ml trietil-amint és 2,12 g Z-Phe-ONP észtert adunk hozzá, majd a reakcióelegyet 0 C° hőmérsékleten 2 óra hosszat és ezt követően 20 C°on 20 óra hosszat keverjük. Ezután a reakcióelegyet vákuumban bepároljuk, a kapott olajszerű maradékot 10:1 arányú etilacetát-víz elegyben oldjuk és az oldatot a fenti 1. bekezdésben leírt módon dolgozzuk fel tovább. A szerves oldószeres fázis bepárlása útján kapott maradékot 5 ml metanolban oldjuk és az oldatot lassan beleöntjük 100 ml vízmentes éterbe, aminek hatására a kapott peptid kiválik. 2,9 g terméket kapunk, amelynek Rf-értéke (szilikagélen, 8:2 arányú benzol-etanol oldószer-rendszerben): 0,48. 9
