169159. lajstromszámú szabadalom • Eljárás pszichofarmakológiailag aktív peptidek előállítására
33 169159 34 A közvetlenül kapott termékekben a trifluor-acetát-csoportot a már ugyancsak ismertetett módon, Dowex X-8 gyanta segítségével acetát-csoportra cseréljük ki, ily módon 85-92% termelési hányaddal kapjuk az alább felsorolt hexapeptideket acetát alakjában. (A megadott Rf-értékek meghatározása szüikagélen, a 2 :0,75 :0,25 :1 arányú Bu-Py-Ac-víz oldószer-rendszerben történt.) H-Met-Glu-D-His-Phe-Lys-Trp-OH-acetát, Rf 0,32 H-|3-Ala-Glu-D-His-Phe-Lys-Trp--OH-ac'etát, Rf 0,25 H-Val-Glu-D-His-Phe-Lys-Trp-OH-acetát, Rf 0,31 H-(a-Me)Ala-Glu-D-His-Phe-Lys-Trp-OH-acetát, Rf 0,30 H-Gly-Glu-D-His-Phe-Lys-Trp-OH-acetát, Rf 0,27 Deza mino-M et-Glu-D-His-Phe-Lys-Trp-OH-acetát, Rf 0,37 9. példa H-Met-Glu-D-His-Phe-Lys-Trp-OH és származékai 1. Boc-Met-Glu(OtBu)-D-His-Phe-Lys(Boc)-Trp-Y' [Y=-OH, NH2 , -OC,,H23 vagy -N(CH 3 ) 2 ] 9,35 g Boc-Met-Glu(OtBu)-D-His-N2 H 3 hidrazidot a szokásos móclon a megfelelő aziddá alakítunk át (vö. 3. példa, 1. szakasz), majd további oldószer hozzáadásával a kapott oldat térfogatát pontosan 50 ml-re állítjuk be. Ezt az oldatot 5 részre osztjuk, 1/5 részt hozzáadunk 3,2 millimól H-Phe-Lys(Boc)-Trp-OH • HCl (előállítva a K.2. példa szerint) 10 ml dimetil-formamiddal készített és 0 C° hőmérsékletre hűtött oldatához. További 1/5 részt hozzáadunk 3,2 millimól H-Phe-Lys(Boc)-Trp-NH2 • HCl (előállítva a K.5. példa szerint) 10 ml dimetil-formamiddal készített és 0 C° hőmérsékletre hűtött oldatához. További 1/5 részt hozzáadunk 3,2 millimól H-Phe-Lys(Boc)-Trp-OCnH 23 .• HCl (előállítva a K.5. példa szerint) 10 ml dimetil-formamiddal készített és 0C° hőmérsékletre hűtött oldatához. További 1/5 részt hozzáadunk 3,2 millimól H-Phe-Lys(Boc)-Trp-N(CH3) 2 • HCl (előállítva a K.5. példa szerint) 10 ml dimetil-formamiddal készített és 0 C° hőmérsékletre hűtött oldatához. Ezután mindegyik elegy pH-értékét trietil-aminnal 7,2 és 7,3 közöttire állítjuk be. Ezeket az elegyeket 0 C° hőmérsékleten 70 óra hosszat keverjük, majd vákuumban, 40 C° hőmérsékletű fürdőben bepároljuk az elegyeket és a maradékot vizes etilacetáttal felvesszük. A szerves oldószeres fázisokat vízzel háromszor mossuk, majd az elkülönített etilacetátos oldatokat vákuumban bepároljuk, a maradékot etanolban oldjuk és a kapott oldatokat a termék leválasztása céljából peroxidmentes éterrel hígítjuk. 10 15 20 25 30 Rf 0,25 71% Rf 0,38 57% Rf 0,49 61% Rf 0,45 50% Ily módón az alább felsorolt termelési hányadokkal kapjuk az egyes hexapeptid-származékokat (a megadott Rf -értékeket szüikagélen, a 8:2 arányú benzol-etanol oldószer-rendszerben határoztuk meg): hexapeptid-sav, hexapeptid-amid, hexapeptid-észter, hexapeptid-dimetilamid, Hozamok: 75% és 85% között 2. A védőcsoportok eltávolítása 0,5 g fenti módon előállított hexapeptidet 25 ml 90%-os trifluor-ecetsavban oldunk és az oldatot 20 C° hőmérsékleten 1 óra hosszat keverjük. A reakcióelegyet ezután beleöntjük 300 ml vízmentes, peroxidmentes éterbe, majd a képződött csapadékot leszűrjük és szilárd kálium-hidroxid felett megszárítjuk. 250 mg fenti módon kapott terméket 30 ml 1 : 1 arányú terc—butanol — víz elegyben oldunk és acetát-fázisú Dowex X-8 gyantával keverjük, 5,2 végső pH-érték eléréséig. Az elegyet leszűrjük és a szűrlethez további 20 ml terc-butanol - víz elegyet adunk, majd az egész oldatot szárazra pároljuk. Ily módon az alább felsorolt szabad hexapeptid-származékokat kapjuk acetát alakjában. (A megadott Rf-értékek meghatározása szüikagélen, a 2:0,75:0,25:1 arányú Bu-Py-Ac-víz oldószer-rendszerben történt.) H-Met-Glu-D-His-Phe-Lys-Trp-35 -OH-acetát, Rr 0,32 H-Met-Glu-D-His-Phe-Lys-Trp-NH2-acetát, ^ Rf 0,37 H-Met-Glu-D-His-Phe-Lys-Trp-OC,iH23-acetát, Rf 0,47 40 H-Met-Glu-D-His-Phe-Lys-Trp-N(CH3 ) 2 -acetát, Rf 0,42 10. példa 45 H-Met-Glu-D-His-Phe-Arg-Trp-OH A 3. példa 1. szakaszában leírt módon előállított Boc-Met-Glu(OtBu)-D-His-N3 azid és az L.4. példa szerint előállított H-Phe-Arg-Trp-OH-ace-50 tát kiindulási anyagokból, a reakcióelegy 0 C° hőmérsékleten 70 óra hosszat történő keverése útján a H-Met-Glu-D-His-Phe-Arg-Trp-OH hexapeptidet állítjuk elő. A reakcióelegy bepárlása után kapott maradékot 55 dimetil-formamidban oldjuk és ezt az oldatot tízszeres térfogatú vízbe öntjük. A képződött csapadékot elkülönítjük, megszárítjuk és az előző példában leírt módon dolgozzuk fel. Az itt kapott hexapeptid Rf-értéke (szüikagélen, 60 a 4 : 0,75 : 0,25 : 1 arányú Bu-Py-Ac-víz oldószer --rendszerben): 0,17. A leírt módon kapott, világos rózsaszínű amorf terméket további tisztítás céljából ellenáramú megosztásnak vetjük alá a 4:1:5 arányú 65 Bu-Ac-víz oldószer-rendszerben. Hozam: 40%. 17
