169159. lajstromszámú szabadalom • Eljárás pszichofarmakológiailag aktív peptidek előállítására
31 169159 32 2. H-Met-D-Glu-His-Phe-Lys-Trp-OH 1,6 g fenti módon kapott peptidet 25 ml 90%-os trifluor-ecetsavban oldunk. A kapott világosvörös színű oldatot 30 percig állni hagyjuk, majd 5 beleöntjük 400 ml vízmentes és peroxidmentes éterbe. A kivált szilárd terméket szűréssel elkülönítjük és megszárítjuk. Az így kapott sót 70 ml 1:1 arányú terc-butanol - víz elegyben oldjuk. Acetát-fázisú Dowex X-8 gyantát adunk 10 az oldathoz 5-5,5 végső pH-értékig. Az elegyet 1 óra hosszat keverjük, majd az ioncserélő gyantát kiszűrjük és a szűrletet liofilizáljuk. így termékként H-Met-D-Glu-His-Phe-Lys-Trp-OH-acetátot kapunk. Hozam: 80%. *5 A kapott termék Rf -értéke szilikagélen, a 2 : 0,75 : 0,25 : 1 arányú Bu-Py-Ac-víz oldószer --rendszerben:0,17. 3. A fenti példa 1. szakaszában leírt módon 20 előállított azidot az 1. és 2. szakaszban leírt eljárással a K.5. példa szerint előállított H-Phe-Lys(Boc)-Trp-NH2 amiddal vagy a H-Phe-Lys(Boc)-Trp-OC(1 H 2 3 észterrel kapcsoljuk, majd a védőcsoportokat a fentebb már ismertetett eljárással 25 eltávolítjuk. Ily módon az alábbi peptidek acetátjait kapjuk: H-Met-D-Glu-His-Phe-Lys-Trp-NH2 --acetát, 30 H-Met-D-Glu-His-Phe-Lys-Trp-OC, jH2 3-acetát. 8. példa 35 H-A-Glu-D-His-Phe-Lys-Trp-OH [A = Met, ß-Ala, Val, (a-Me)Ala, Gly vagy dezamino-Met] 40 1. Z-Glu(OtBu)-D-His-Phe-Lys(Boc)-Trp-OH 4,1 g Z-Glu(OtBu)-D-His-N2 H 3 hidrazidot (előállítva a C.2. példa szerint) 60 ml dimetil-formamid- 45 ban oldunk. Az oldatot 0 C° hőmérsékletre hűtjük, 5,5 ml tetrahidrofurános n sósavoldatot adunk hozzá, majd -20 C° hőmérsékletre hűtjük és 1,35 ml izoamil-nitritet adunk az elegyhez. Az így kapott azidot tartalmazó reakcióelegyet -20 C 5° hőmérsékleten 10 percig keverjük, majd hozzáadjuk 8,4 mülimól H-Phe-Lys(Boc)-Trp-OH • HCl (előállítva a K.2. példában leírt módon) 20 ml dimetil-formamiddal készített oldatához. A reakcióelegy pH-értékét 7,2-re állítjuk be, majd az elegyet 0 C° 55 hőmérsékleten 100 óra hosszat keverjük. Ezután leszűrjük a reakcióelegyet és a szűrletet vákuumban szárazra pároljuk. A maradékot etilacetátban oldjuk, az oldatot vízzel, majd vizes 10%-os citromsav-oldattal, aztán ismét vízzel, végül vizes 60 4%-os nátrium-klorid-oldattal mossuk és szárítjuk. Az etilacetátot ledesztilláljuk, a maradékot 25 ml dimetil-formamidban oldjuk és ezt az oldatot hozzácsepegtetjük 600 ml 1:2 arányú etilacetát -—éter elegyhez. 65 Ily módon 5,3 g terméket kapunk, amelynek Rf-értéke (szilikagélen, a 4 :0,75 : 0,25 : 1 arányú Bu-Py-Ac-víz oldószer-rendszerben): 0,73. 2. H-Glu(OtBu)-D-His-Phe-Lys(Boc> -Trp-OH • HCl 5 g fenti módon (az 1. bekezdés szerint) kapott peptidet 100 ml dimetil-formamidban oldunk, 2,2 ml 4 n sósavoldat hozzáadásával. Ezután 1 g 10%-os palládíumos aktívszén-katalizátort adunk az elegyhez és hidrogén-gázt buborékoltatunk az elegyen keresztül. 24 óra múlva a reakcióelegyet leszűrjük és a szűrletet vákuumban bepároljuk. A maradékot metanol és éter-elegyéből atkristályosítjuk. Ily módon 4,5 g fenti peptidet kapunk, amelynek Rf -értéke (szilikagélen, a 7:2:1 arányú Am-Fo-víz oldószer-rendszerben): 0,68. 3. Boc-Met-Glu(OtBu)-D-His-Phe-Lys(Boc)-Trp-OH 0,982 g (3,73 mülimól) Boc-Met-N2 H 3 azidot 20 ml dimetil-formamidban oldunk. Az oldatot 0 C° hőmérsékletre hűtjük, 3,8 ml tetrahidrofurános 2 n hidrogénklorid-oldatot adunk hozzá, majd ezt az elegyet -20 C° hőmérsékletre hűtjük és 0,5 ml izoamil-nitritet adunk hozzá. A reakcióelegyet 10 percig keverjük -20 C° hőmérsékleten. A fenti módon kapott azid-oldatot hozzáadjuk 3,2 g H-Glu(OtBu)-D-His-Phe-Lys(Boc)-Trp-OH-HCl-hoz (előállítva a 8. példa 2. bekezdése szerint) majd az elegyet pH-értékét trietil-aminnal 7,l-re állítjuk. Az elegyet 0 C° hőmérsékleten 71,5 óra hosszat keverjük, majd leszűrjük és a szűrletet szárazra pároljuk. A maradékot bekeverjük 100 ml etilacetátba és a kivált terméket elkülönítjük. Ily módon 3,05 g fenti peptidet kapunk, amelynek Rf -értéke (szilikagélen, a 4 : 0,75 : 0,25 : 1 arányú Bu-Py-Ac-víz oldószer-rendszerben): 0,83. 4. A fenti 3. bekezdésben leírttal egyező módon, a kívánt terméknek megfelelő Boc-aminosav-azidnak a H-Glu(OtBu)-D-His-Phe-Lys(Boc)-Trp-OH • HCl peptid-hidrokloriddal való kapcsolása útján állítjuk elő az alább felsorolt további hasonló peptideket is: Boc-/3-Ala-Glu(OtBu)-D-His-Phe-Lys(Boc)--Trp-OH Boc-Val-Glu(OtBu)-D-His-Phe-Lys(Boc)-Trp-OH Boc-(a-Me)-Ala-Glu(OtBu)-D-His-Phe-Lys(Boc)-Trp-OH Boc-Gly-Glu(OtBu)-D-His-Phe-Lys(Boc)-Trp-OH Dezamino-Met-Glu(OtBu)-D-His-Phe-Lys(Boc)-Trp-OH. 5. H-A-Glu-D-His-Phe-Lys-Trp-OH 2g oly peptidet, amelyet a 8. példa 3. vagy 4. szakaszában leírt módon állítottunk elő, 45 ml 90%-os trifluor-ecetsavban oldunk és a védőcsoportok lehasítására az előző példákban ismertetett eljárás szerint kezelünk. 16
