169158. lajstromszámú szabadalom • Eljárás pszichofarmakológiailag hatásos peptidek előállítására - antidepresszáns
17 169158 18 A kapott elegyet 0C° hőmérsékleten 20 óra hosszat, majd szobahőmérsékleten 5 óra hosszat keverjük. A reakcióelegyet azután szárazra pároljuk és a maradékot éterrel háromszor elkeverjük. Az így kapott világossárga színű csapadékot etanol és éter ele- 5 gyéből néhányszor átkristályosítjuk. A kapott Z-Phe-D-Arg(N02 )-Tra R f -értéke 0,41. (szilikagélen, a benzol-etanol 8 : 2 rendszerben). Hozam: 1,5 g. 2. H-Phe-D-Arg-Tra-acetát 10 Az 1. szakasz szerint kapott peptid 1,5 g mennyiségét 20 ml 90%-os ecetsavban oldjuk, majd 150 mg 10%-os palládiumos aktívszén-katalizátort adunk hozzá. Az elegyen keresztül hidrogén-gázáramot bu- 15 borékoltatunk két napig, majd a reakcióelegyet „Hyflo" szűrőanyag-rétegen keresztül leszűrjük, a szűrletet szárazra pároljuk és a maradékot terc-butanol és víz 1 :1 arányú elegyében oldjuk, majd a kapott oldatot liofilizáljuk. Hozam: 75%. 20 Az így kapott H-Phe-D-Arg-Tra-acetát Rf-értéke 0,26 (szilikagélen, a butanol-piridin-ecetsav-víz 4 :0,75 : 0,25 :1 rendszerben). O) H-Phe-D-Arg-Trp-Gly-OH-acetát 25 szintézise 1. Boc-D-Arg(N02 )-Trp-Gly-OH 5,76 g Boc-D-Arg(N02 )-OH-ot 70 ml dimetü-for- 30 mamid és 2,52 ml trietilamin elegyében oldunk. Az oldatot -10 C° hőmérsékletre hűtjük, majd 2,38 ml klórhangyasav-izobutilésztert adunk hozzá és ezt az elegyet -10 C° hőmérsékleten 10 percig keverjük. A fenti módon előállított vegyes anhidrid-oldathoz 35 azután 4,7 g H-Trp-Gly-OH 40 ml dimetil-formamid és 2,0 ml trietilamin elegyével készített és -5 C° hőmérsékletre lehűtött oldatát adjuk, majd a kapott elegy pH-értékét trietilamin hozzáadásával 7,2-re állítjuk be. Az elegyet 0 C° hőmérsékleten 2 óra hosszat, 40 majd szobahőmérsékleten 20 óra hosszat keverjük, azután a képződött csapadékot kiszűrjük és a szűrletet szárazra pároljuk. A kapott maradékot vizes etilacetátban oldjuk. A szerves oldószeres fázist elkülönítjük, vizes citromsav-oldattal, majd nátriumklorid- 45 -oldattal mossuk és megszárítjuk. Szűrés után az etilacetát egy részének elpárologtatása útján az oldatot körülbelül 100 ml térfogatra betöményítjük, majd annyi étert adunk hozzá, amennyi az oldat megzavarósodásának előidézésére 50 szükséges. Az elegyet állni hagyjuk, majd a képződött csapadékot szűréssel elkülönítjük. Hozam: 6,4 g. Az így kapott Boc-D-Arg(N02 )-Trp-Gly-OH R f -értéke 0,65. (szilikagélen, a benzol-etanol 8 : 2 rendszerben). 55 2. H-D-Arg(N02 )-Trp-Gly-OH • HCl 6g fenti módon kapott tripeptidet diklórmetánban szuszpendálunk, majd száraz sósavgázt buborékoltatunk 30 percig a szuszpenzión keresztül. Egy idő 60 múlva megkezdődik a tripeptid hidrokloridjának kiválása. Az elegyet 20 C° hőmérsékleten 2 óra hosszat keverjük, majd a kapott terméket szűréssel elkülönítjük, vízmentes éterrel háromszor mossuk, végül szilárd kálium-hidroxid felett megszárítjuk. 65 Rf 0,54 (szilikagélen, az amilalkohol-piridin-víz 5:3: 2 rendszerben) Hozam: 4,8 g. 3. Z-Phe-D-Arg(N02 )-Trp-Gly-OH A H-D-Arg(N02)-Trp-Gly-OH.HCl tripeptidből kiindulva, az N) példa 1. szakaszában leírt módon, a Z-Phe-ONP észterrel történő kondenzáció útján állítjuk elő a Z-Phe-D-Arg(N02 )-Trp-Gly-OH tetrapeptidet, hozam: 63%. Rf 0,12 (szilikagélen, a benzol-etanol 8 :2 rendszerben). 4. H-Phe-D-Arg-Trp-Gly-OH-acetát A 3. szakaszban leírt módon előállított védett tetrapeptid 1,5 g-ját az N) példa 2. szakaszában leírt módon hidrogénezzük. Az így kapott H-Phe-D-Arg-Trp-Gly-OH-acetát. Rf 0,21 (szilikagélen, a butanol-piridin-ecetsav-víz 4 : 0,75 :0,25 :1 rendszerben). P) H-Phe-D-Lys(Boc)-Phe-OtBu szintézise 1. Z-D-Lys(Boc)-Phe-OtBu 10,03 g Z-D-Lys(Boc)-ONP észtert 50 ml dimetil-formamidban oldunk. Az oldatot —20 C° hőmérsékletre hűtjük, majd hozzáadjuk 4,1 g H-Phe-OtBu 75 ml dimetil-formamiddal készített oldatához. Az elegyet 0 C° hőmérsékleten 1 óra hosszat, majd 20 C°-on 20 óra hosszat keverjük, azután szárazra pároljuk. A kapott sárga színű maradékot etilacetát és víz elegyében oldjuk, a szerves oldószeres fázist elkülönítjük, majd vizes 5%-os kálium-karbonát-oldattal, azután vízzel, majd 5%-os citromsav-oldattal végül ismét vízzel mossuk, azután szárítjuk és szárazra pároljuk. A maradékot etilacetátban oldjuk, majd 40—60 C° forráspont-tartományú petroléter zavarosodás előidézésére elegendő mennyiségét adjuk az oldathoz. Az így képződött csapadékot szűréssel elkülönítjük. Rf 0,64 (szilikagélen, benzol-etanol 9 : 1 rendszerben). Hozam: 8,5 g. 2. H-D-Lys(Boc)-Phe-OtBu 3g fenti módon kapott dipeptidet 60 ml metanolban oldunk. Az oldathoz 10%-os palládiumos aktívszén-katalizátort adunk, azután addig buborékoltatunk hidrogéngázt az elegyen keresztül, míg szén-dioxid már nem távozik el a reakcióelegyből (ehhez körülbelül 2 óra szükséges). A katalizátort azután kiszűrjük a reakcióelegyből és a szűrletet szárazra pároljuk, habszerű termék alakjában kapjuk a H-D-Lys(Boc)-Phe-OtBu védett dipeptidet. Rf 0,25 (szilikagélen, toluol-etanol 9 :1 rendszerben). Hozam: 2,2 g. 3. Z-Phe-D-Lys(Boc)-Phe-OtBu 2,18 g Z-Phe-ONP észtert 15 ml dimetil-formamidban oldunk, majd 2,24 g H-D-Lys(Boc)-Phe-OtBu 9
