169158. lajstromszámú szabadalom • Eljárás pszichofarmakológiailag hatásos peptidek előállítására - antidepresszáns
15 169158 16 adunk és az elegyet 20 C" hőmérsékleten 20 óra hosszat keverjük, majd 0,2 g 2-dimetilamino-etilamint adunk hozzá. A reakcióelegy ezután további 2 óra hosszat keverjük, majd az oldószert elpárologtatjuk és a maradékot 250 ml etilacetát és víz elegyében oldjuk. A kapott oldatot először vizes 5%-os kálium-karbonát-oldattal, majd 0,5 n sósavoldattal, végül vízzel mossuk, majd az elkülönített szerves oldószeres fázist vízmentes nátrium-szulfáttal szárítjuk. A nátrium-szulfát kiszűrése után a szűrletet szárazra pároljuk és a kapott olajszerű maradékot elszappanosítjuk. Ebből a célból 6,54 g így kapott észtert 100 ml dioxánban oldunk és 11,8 ml 1,5 n nátrium-hidroxid-oldatot adunk hozzá. Az elegyet 2 óra hosszat keverjük, majd 1,5 n sósavoldattal 7 pH-értékre semlegesítjük és a dioxánt vákuumban elpárologtatjuk. A maradékhoz etilacetátot és vizet adunk, a vizes réteget (a fázisok elkülönítése nélkül) híg sósavval 2 pH-értékre állítjuk. Ezután a szerves oldószeres fázist elkülönítjük, vízzel mossuk és szárítjuk. Az etilacetátos vákuumban ledesztilláljuk, olajszerű maradékot kapunk, amely éterrel keverve megszilárdul. Az így kapott termék 84 C°-on olvad (bomlás közben). Hozam: 5,2 g. Rf 0,81 (5 : 3 : 2 arányú amilalkohol-piridin-víz oldószer-rendszerben szilikagélen). 2. H-Phe-D-Lys(Boc)-Trp-OH- HCl 1,85 g fenti módon kapott tripeptidet 40 ml dimetil-formamidban oldunk és 1 mólekvivalens sósavat adunk az oldathoz. Ezután 350 mg 10%-os palládiumos aktívszén-katalizátort adunk hozzá, majd 6 óra hosszat hidrogéngázt buborékoltatunk az elegyen keresztül. A katalizátort ezután kiszűrjük és a szűrletet azonnal felhasználjuk a további reakciókhoz. Rf 0,70 (5:3:2 arányú amilalkohol-piridin-víz oldószer-rendszerben, szilikagélen). 3. Z-Phe-D-Lys(Boc)-Trp-NH2 vagy Z-Phe-D-Ly<Boc)-Trp-N(CH3 ) 2 Az 1. bekezdésben leírt eljárással kapott nyers észter 2g mennyiségét hozzáadjuk 25 ml 10 n ammóniumhidroxid-oldathoz vagy ugyanilyen mennyiségű metanolos dimetil-amin oldathoz. A kapott elegyet 2 napig keverjük, majd szárazra pároljuk és a maradékot metanolból átkristályosítjuk. Rf az amid esetében 0,35, a dimetilamid esetében 0,41 (8 : 2 arányú benzol-etanol oldószer-rendszerben, szilikagélen). Hozam: 88%, illetve 80%. 4. Z-Phe-D-Lys(Boc)-Trp-OC,, H2 3 3,6 g Z-Phe-D-Lys(Boc)-Trp-OH (előállítva az 1. bekezdésben leírt módon) 45 ml dimetil-formamiddal készített oldatához 1,35 g undecil-bromidot és 1,0 g diciklohexil-amint adunk. Az elegyet 35 C° hőmérsékleten 48 óra hosszat, majd 0 C°-ra lehűtve további 2 óra hosszat keverjük, majd a kivált diciklohexil-ammóniumbromidot kiszűrjük és a szűrletet vákuumban szárazra pároljuk. A maradékot etilacetátban oldjuk, az oldatot 0,1 n sósavoldattal, majd vízzel, azután vizes 10%-os nátrium-hidrogén-karbo nát oldattal, végül ismét vízzel mossuk. A szerves oldószeres fázist elkülönítjük, vízmentes nátrium-szulfáton rövid ideig szárítjuk, azután vákuumban részlegesen bepároljuk és a maradékhoz n-hexánt adunk. 5 Ennek hatására a termék kikristályosodik, hozam: 3,2 g. Rf 0,45 (8 : 2 arányú benzol-etanol oldószer-rendszerben, szilikagélen). 10 5. A Z-csoport eltávolítása Ugyanolyan módon, amint ezt a fenti 2. bekezdésben ismertettük, a 3. és 4. bekezdés szerinti módon előállított tripeptidek 1 g mennyiségét pallá-15 diumos aktívszén-katalizátor jelenlétéberi hidrogénezzük. így az alább felsorolt peptidek hidroklorid-sóját kapjuk: 20 1. H-Phe-D-Lys(Boc)-Trp-NH2 -HCl Rf = 0,73 2. H-Phe-D-Lys(Boc)-Trp-N(CH3 ) 2 • HCl Rf = 0,77 3. H-Phe-D-Lys(Boc)-Trp-25 -0Cn H 23 • HCl Rf = 0,78 A fenti Rf-értékeket szilikagélen határoztuk meg, az amilalkohol, piridin és víz 5:3:2 arányú elegyéből álló rendszerben. Hozam: 90-95%. 30 M) H-Phe-D-Lys(Boc)-Tra szintézise 1. Z-Phe-D-Lys(Boc)-Tra 35 Ezt a peptidet az L) példa 1. szakaszában ismertetett eljárással állítjuk elő Z-Phe-ONP és H-D-Lys(Boc)-Tra [olaj. Rf 0,70 (szilikagélen. az amilalkohol-hangyasav-víz 7:2:1 rendszerben)] kiindulási anyagokból. 40 A kapott nyers terméket metanol, éter és petroléter elegyéből néhány napi állással kristályosítjuk, a termék 159-172 C°-on olvad. Rf 0.73 (szilikagélen. a benzol-etanol 8 : 1 rendszerben). Hozam: 70'/. 45 2. H-Phe-D-Lys(Boc)-Tra A fenti 1. szakasz szerint kapott dipeptid-amidot metanolban, 10%-os palládiumos aktívszén-katalizátor jelenlétében hidrogénezzük. így 92% hozammal kap-50 juk a H-Phe-D-Lys(Boc)-Tra peptidet. Rf 0,75 (szilikagélen. az amilalkohol-piridin-víz 5:3:2 rendszerben). Rf 0,80 (a butanol-ecetsav-víz 4:1:1 rendszerben, szilikagélen). 55 N) H-Phe-D-Arg-Tra szintézise l.Z-Phe-D-Arg(N02 )-Tra 60 2,1 g Z-Phe-ONP észtert 20 ml dimetil-formamidban oldunk, majd a kapott világossárga oldatot -5 C° hőmérsékletre hűtjük. Ezután hozzáadjuk 1,81 g H-D-Arg(N02 )-Tra lehűtött oldatát [ez utóbbi vegyületet a 114C°-on bomlás közben olvadó Boc-D-65 -Arg(N02 )-Tra-ból állítjuk elő.] 8
