169157. lajstromszámú szabadalom • Eljárás pszichofarmakológiai hatású peptidek előállítására
17 169157 lí 3. H-Phe-Lys(Boc)-Phe-Gly-OH 1 g, a 2. lépésben előállított peptid 20 ml 1:1 arányú metanol-víz eleggyel készített oldatához 10%-os palládium/csontszén katalizátort adunk, és az elegybe 5 órán át hidrogéngázt vezetünk. Az elegyet „Hyflo" szűrési segédanyagon keresztül szűrjük, a szűrletet bepároljuk, és a maradékot vízmentes éterrel eldörzsöljük. 0,7 g terméket kapunk. A kapott H-Phe-Lys(Boc)-Phe-Gly-OH Rf-értéke 0,43 (szilikagél-lemezen 4:1:1 arányú butanol-ecetsav-víz elegyben). 1. példa H-Met-Glu-His-Phe-Arg-Phe-Gly-OH előállítása A) Boc-Met-Glu(OtBu)-His-Phe-Arg-Phe-Gly-OH 8,39 g Boc-Met-Glu(OtBu)-His-N2 H 3 (az A) példa 2. lépésében kapott termék) 80 ml dimetilformamiddal készített oldatához 0 C°-on, keverés közben 26,2 ml 1,6 n tetrahidrofurános sósavoldatot adunk. Az elegyhez ezután -20 C°-on 1,88 ml izoamilnitritet adunk, az elegyet 20 percig -20 C°-on keverjük, majd egymás után 5,8 ml trietilamint, 10 ml dimetilformamidot, és 8,14 g H-Phe-Arg-Phe-Gly-OH-acetát (a H) példa 7. lépésében kapott termék) 90 ml dimetilformamiddal készített, trietilaminnal pH = 7 értékre lúgosított oldatát adjuk hozzá. Az elegyet 30 percig -20 C°-on keverjük, majd hűtőszekrénybe helyezzük. Az elegy pH-ját időközönként mérjük, és szükség esetén 7-re állítjuk. 48 óra elteltével a kivált csapadékot (trietilammóniumklorid) kiszűrjük, és a szűrletet vákuumban szárazra pároljuk. A maradékot 450 ml etilacetátban felvesszük. Az elegyet lehűtjük, és a kivált szürkésfehér anyagot centrifugálással elkülönítjük. A szilárd anyagot egymás után etilacetáttal, éterrel. 0,07 n sósavoldattal és vízzel mossuk, majd szárítjuk. A termék Rf-értéke 0,41 (szilikagél-lemezen 4:0,75:0,25:1 arányú butanol-piridin-ecetsav-víz elegyben). Hozam: 68%. B) H-Met-Glu-His-Phe-Arg-Phe-Gly-OH-HAc 3,71 g (3,42 mmól), az A) lépésben kapott heptapeptidet 40 ml 90%-os trifluorecetsavban oldunk, és az oldatot 2 órán át szobahőmérsékleten keverjük. Az elegyet keverés közben 350 ml éterbe öntjük. 1 órás keverés után a kivált csapadékot leszűrjük, éterrel mossuk, szárítjuk, majd 1 : 1 arányú butanol-víz elegyben oldjuk. Az oldatot körülbelül 2 g acetát-formájú Dowex X 8 ioncserélő gyantával elegyítjük, az elegyet 30 percig keverjük, majd ismét 2g Dowex ioncserélő gyantát adunk hozzá. Végül az ioncserélő gyantát kiszűrjük, és a szűrletet liofilizáljuk. A termék Rf -értéke 0,30 (szilikagél-lemezen 2 : 0,75 : 0,25 :1 arányú butanol-piridin-ecetsav-víz elegyben). 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 A terméket ellenáramú megosztással tisztítjuk, oldószerként 4:1:5 arányú butanol-ecetsav-víz elegyet használunk. A tisztított aminosav-összetétele a 'következő: His = 1,04, Arg = 1,00, Glu = 1,00, Gly=l,00, Met = 0,98, Phe=l,99. A terméket 85%-os hozammal kapjuk. 2. példa A-Glu-His-Phe-Arg-Phe-Gly-OH-HAc általános képletű peptidek előállítása (A = D-Met, 0-Ala, Val, (aMe)Ala vagy dezamino-Met-csoport) A H) példa 7. lépésében előállított H-Phe-Arg-Phe-Gly-OH • HAc-t az 1. példában leírt eljárás szerint a B) példa 2. lépésében, a C) példa 2. lépésében, a D) példa 2. lépésében, az F) példa 2. lépésében, illetve az F) példa 3. lépésében előállított pepiiddel kondenzáljuk, majd a védő csoportokat lehasítjuk. A következő peptideket kapjuk: 1. H-D-Met-Glu-His-Phe-Arg--Phe-Gly-OH-HAc Rf = 0,31 2. H-Val-Glu-His-Phe-Arg-Phe-Gly-OH-HAc Rf = 0,28, 3. H-0-Ala-Glu-His-Phe-Arg--Phe-Gly-OH-HAc Rf = 0,28, 4. H-(a-Me)Ala-Glu-His-Phe--Arg-Phe-Gly-OH-HAc Rf = 0,30, 5. Dezamino-Met-Glu-His-Phe--Arg-Phe-Gly-OH-HAc Rf = 0,33. Az Rf-értékeket 2 :0,75 : 0,25 : 1 arányú butanol-piridin-ecetsav-víz elegyben határoztuk meg, szilikagél-lemezen. 3. példa A-Glu(X)-His-Phe-Lys-Phe-Gly-OH-HAc általános képletű peptidek előállítása (A = Met vagy dezamino-Met csoport, X = OH) 1. Boc-Met-Glu(OtBu)-His-Phe-Lys(Boc)-Phe-Gly-OH 2,1 g Boc-Met-Glu(OtBu)-His-N2 H 3 -t (az A) példa 2. lépésében kapott termék) az 1. példa A) lépésében leírt módon izoamilnitrites reakcióval a megfelelő aziddá alakítunk, majd a kapott azidot a P) példa 3. lépésében kapott H-Phe-Lys(Boc)-Phe-Gly-OH-val kondenzáljuk. A kapott reakcióelegyet 70 órán át 0 C°-on keverjük, majd vízbe öntjük. A kapott csapadékot 1 : 1 arányú etilacetát-etanol elegyben oldjuk, és az oldatot lassú ütemben éterhez adjuk. A kivált csapadékot leszűrjük. A termék Rr értéke 0,54 (szilikagél-lemezen 4 : 0,75 : 0,25 : 1 arányú butanol-piridin-ecetsav-víz elegyben). Hozam: 72%. 9
