169157. lajstromszámú szabadalom • Eljárás pszichofarmakológiai hatású peptidek előállítására
15 I69157 16 4. H-Phe-Lys(Boc)-Phe-OH 0,5 g, a 2. lépésben kapott peptid 6 ml metanollal készített oldatához 1 mól ekvivalens nátriumhidroxidot adunk. Az elegyet 1 órán át keverjük, 5 majd enyhén megsavanyítjuk. A H-Phe-Lys(Boc)-Phe-OH kiválik. Rf = 0,18 (szilikagél-lemezen 8:2 arányú benzol-etilalkohol elegyben). Hozam: 70%. 10 5. H-Phe-Lys(Boc)-Phe-0(CH2 ) 3 -C 6 H 5 1 g Z-Phe-Lys(Boc)-Phe-OH-t (az 1. lépésben kapott metilészter elszappanosításával, a 4. lépésben leírt módon előállított termék) 15 ml dimetilforma- 15 midban oldunk, és az oldathoz 1,1 ekvivalens fenilpropilbromidot és 1,1 ekvivalens diciklohexilamint adunk. Az elegyet 2 napon át keverjük, majd a szuszpenziót 0 C°-ra hűtjük és szűrjük. A szűrletet bepároljuk, a maradékhoz vizes etilace- 20 tatot adunk, majd 0,1 n vizes sósavoldattal, vízzel, 5%-os vizes nátriumhidrogénkarbonát-oldattal és ismét vízzel mossuk. Az etilacetátos fázist szárítjuk és bepároljuk. A maradékként kapott vegyületből a Z csoportot a 2. lépésben leírt eljárással lehasítjuk. 25 H-Phe-Lys(Boc)-Phe-0(CH2 ) 3 -C 6 H s -t kapunk, Rf = 0,40 (szilikagél-lemezen 8 : 2 arányú benzol-etanol elegyben). Hozam: 65%. 30 N) példa H-Phe-Arg-Phe-származékok előállítása 1. Z-Phe-Arg(N02 )-Phe-OMe 35 2,3 g H-Arg(N02 )-Phe-OMe • HBr (op.: 163 C°, bomlás) 0,73 ml trietilaminnal készített, 0 C°-os oldatához 2,1 g Z-Phe-ONP 25 ml dimetilformamiddal készített oldatát adjuk. A reakcióelegyet 40 2 órán át 0 C°-on és 20 órán át 20 C°-on keverjük, majd bepároljuk. A maradékot szűrjük, és a szűrletet éterrel háromszor elkeverjük. A maradékot 2 :1 arányú metanol-éter elegyből kristályosítjuk. Z-Phe-Arg(N02 )-Phe-OMe-t kapunk, R f = 0,68 (szi- 45 likagél-lemezen 8 :2 arányú benzol-etanol elegyben). 2. Z-Phe-Arg(N02 )-Phe-NH 2 vagy 50 Z-Phe-Arg(N02 )-Phe-N(CH 2 ) 0,8 g, az 1. lépésben kapott tripeptidészter 30 ml metanollal készített, körülbelül 0 C°-os oldatát ammóniával telítjük, vagy az oldathoz körül- 55 belül 10 mól ekvivalens dimetilamint adunk. Az elegyet 20 órán át 0 C°-on keverjük, majd szobahőmérsékletre hagyjuk melegedni. A kapott szuszpenziót 1 órán át keverjük, majd szűrjük. A Z-Phe-Arg(N02 )-Phe-NH 2 R f -értéke 0,53 60 (szilikagél-lemezen 8 :2 arányú benzol-etanol elegyben). A Z-Phe-Arg(N0 2)-Phe-N(CH 3 ) 2 R f-értéke 0,62 (szilikagél-lemezen 8 :2 arányú benzol-etanol elegyben). 65 3. Z-Phe-Arg(N02 )-Phe-OH 1,28 g, az 1. lépésben előállított tripeptid-észtert 2 ml 1 n nátriumhidroxid-oldat és 10 ml metanol elegyében oldunk. Az elegyet a tiszta oldat képződése után még 15 percig keverjük, majd sósavoldattal pH = 3 értékre savanyítjuk. A kivált csapadékot leszűrjük és vízzel mossuk. Rf = 0,43 (szilikagél-lemezen 8 : 2 arányú benzol-etanol elegyben). 4. A védőcsoport lehasítása Az 1., 2. vagy 3. lépésben kapott tripeptid 0,5 g-ját 25 ml 90%-os ecetsavban oldjuk. Az oldathoz 10%-os palládium/csontszén katalizátora adunk, majd az elegyet 2 napon át hidrogénezzük. A kapott fekete szuszpenziót szűrjük, a szűrletet vákuumban szárazra pároljuk, és a maradékot vízben felvesszük. Az oldatot szűrjük, majd a szűrletet liofilizáljuk. A következő vegyületeket kapjuk 70—75%-os hozammal. H-Phe-Arg-Phe-OMe-HAc Rf = 0,25, H-Phe Arg-Phe-NH2 -HAc Rf = 0,18, H-Phe-Arg-Phe-N(CH3 ) 2 -HAc Rf = 0,22, H-Phe-Arg-Phe-OH-HAc Rf = 0,12. Az Rf-értékeket szilikagél-lemezen 4:3/4: : 1/4:1 arányú butanol-piridin-ecetsav-víz elegyben határoztuk meg. P) példa H-Phe-Lys(Boc)-Phe-Gly-származékok előállítása 1. Z-Phe-Lys(Boc)-N2 H 3 20 g Z-Phe-Lys(Boc)-OMe 30 ml metanollal és 6 ml hidrazinhidráttal készített oldatát 24 órán át állni hagyjuk, majd 2 órán át 0C°-on keverjük. A kivált 10,8 g csapadékot leszűrjük, hideg metanollal mossuk és szárítjuk. Z-Phe-Lys(Boc)-N2 H 3 -t kapunk, Rf = 0,12 (szilikagél-lemezen 8:2 arányú benzol-etanol elegyben). 2. Z-Phe-Lys(Boc)-Phe-Gly-OBzl 5,42 g, az 1. lépésben kapott hidrazid 20 ml dimetilformamiddal készített, 0 C°-os oldatához 2 mól ekvivalens tetrahidrofurános sósavoldatot adunk, majd az elegyet -20 C°-ra hűtjük. Az elegyhez 1,35 ml izoamilnitritet adunk, 7 percig -20C°-on keverjük, majd 3,5 g H-Phe-Gly-OBzl • • HCl és 4,2 ml trietilamin (pH = 7) elegyéhez adjuk. Az elegyet 70 órán át 0 C°-on tartjuk, majd az oldószert lepároljuk, és a maradékot etilacetát és víz elegyében felvesszük. A szerves fázist 0,1 n vizes sósavoldattal, 5%-os vizes nátriümhidrogénkarbonát-oldattal és vízzel mossuk, magnéziumszulfát fölött szárítjuk, majd az oldószert vákuumban lepároljuk. 6,2 g terméket kapunk. A kapott Z-Phe-Lys(Boc)-Phe-Gly-OBzl Rf-értéke 0,71 (szilikagél-lemezen 8 :2 arányú benzol-etanol elegyben).
