169156. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a vazopresszin 1-5 fragmentjét tartalmazó, pszichofarmakológiailag hatásos peptidek előállítására
7 169156 8 járás kedvező foganatosítási módjaira. Amennyiben mást nem adunk meg, a példákban és az igénypontokban szereplő vegyületek L konfigurációjúak. A példákban használt védőcsoport-rövidítések jelentése a következő: Z = benziloxikarbonil-csoport Boc = terc-butoxikarbonil-csoport tBu = terc-butil-csoport Me = metil-csoport ONP = p-nitrofenil-csoport Bzl = benzil-csoport Tos = tozil-csoport Az aminosav-csoportokat a szakirodalomban megszokott módon az alábbiak szerint rövidítettük: Cys = ciszteinil-csoport Tyr = tirozil-csoport Phe = fenilalanil-csoport Glu(X) = glutamil-csoport (X = OH) Glu (X) = glutaminil-csoport (X = NH2) Asp (X) = aszparagil-csoport (X = OH) Asp (X) = aszparaginil-csoport (X = NH2) Cys-Cys = cisztinil-csoport 1. példa A.l. lépés: Z-Cys(Bzl)-Tyr-OMe 14 g Z-Cys(Bzl)-OH-t feloldunk 60 ml tisztított dimetilformamidban, majd az oldathoz hozzáadunk 8g H-Tyr-ÖMe-t. A kapott szuszpenziót 0C°-ra hűtjük le, majd 8,4 g diciklohexilkarbodiimidet adunk hozzá. Az elegyet ezután keverés közben engedjük felmelegedni. A keverést további 20 órán keresztül folytatjuk, a kivált diciklohex'ilkarbamidot szűréssel elkülönítjük, a szűrletet vákuumban bepároljuk és a párlási maradékot etilacetát-^víz elegyben oldjuk. A szerves fázist 0,1 n sósavval, vízzel, 5%-os nátriumhidrogén-karbonát-oldattal, majd ismét vízzel mossuk, az etilacetátot megszárítjuk és az oldatot vákuumban bepároljuk. A párlási maradékot etilacetát-petroléter elegyből kristályosítjuk át. Hozam: 18,1 g, olvadáspont 92-96 C°. A.2. lépés: Z-Cys(Bzl)-Tyr-OH 8 g fenti vegyületet feloldunk 2 mólekvivalensnyi nátriumhidroxidot tartalmazó 20 ml metanolban, majd az elegyet 1 órán keresztül szobahőmérsékleten keverjük. Ezután az oldatot pH 3-ig savanyítjuk, 200 ml vízzel hígítjuk, 1 órán keresztül 0 C°-on keverjük és a kivált csapadékot szűréssel elkülönítjük. Hozam: 6,2 g, olvadáspont: 200-203 C°. A vegyületet szilikagél adszorbens alkalmazásával vékonyrétegkromatográfiásan vizsgálva a kapott Rí-0,10 (futtatószer: 8:2 arányú benzol-etilalkohol). B.l. lépés: H-Glu(NH2 )-Asp(OBzl)-OBzl • HCl 3,67 g Boc-Glu(NH2 )-ONP-t és 3,13 g 5 H-Asp(OBzl)-OBzl-t feloldunk 25 ml dimetilfoiamidban. Az oldatot Során keresztül 0C°-on, majd íbvábbi 40 órán keresztül szobahőmérsékleten keverjük. Az oldószert ezután vákuumban bepároljuk, a párlási maradékot nedvesen etilacetáttal ele-10 gyítjük, vízzel mossuk, végül az etilacetátos fázist vákuumban bepároljuk. A párlási maradékként kapott olajat száraz metilénkloridban oldjuk, az oldaton száraz sósav-gázt buborékoltatunk át 1 órán keresztül. A gázbevezetés közben kivált dipéptidet 15 szűréssel különíthetjük el. Hozam: 2,7 g, olvadáspont: 170 C° (bomlás közben). A vegyület Rf-értéke a vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat során: 0,37 (futtatószer: amilalkohol-piridin-víz 5:3:2 arányú elegye, adszorbens: 20 szilikagél). B.2. lépés: H-Glu(OBzl)-Asp(OBzl)2 • HCl 25 A B.l. lépésben megadott módon Boc-Glu(OBzl)-ONP-t H-Asp(OBzl)-OBzl-lel kondenzálunk, majd a peptidből a terc-butiloxíkarbonilcsoportot eltávolítjuk. A vegyület Rf-értéke a vé-30 konyrétegkromatografás vizsgálat során: 0,43 (futtatószer: amilalkohol-piridin-víz 5:3:2 arányú elegye, adszorbens: szilikagél). B.3. lépés: 35 H-Glu(OBzl)-Asp(NHCH3)-OBzl • HCl A B.l. lépésben megadott módon Boc-Glu(OBzl)-ONP-t H-Asp(NHCH3 )-OBzl-lel kondenzálunk, majd a Boc védőcsoportot a peptidből 40 eltávolítjuk. A vegyület vékonyrétegkromatografáláskor kapott Rf -értéke 0,39. (Futtatószer: amilalkohol-piridin-víz 5 : 3 : 2 arányú elegye, adszorbens: szilikagél). 45 B.4. Jépés: H-Glu(OBzl)-Asp(NH2 )-OBzl • HCl A B.l. lépésben megadott módon Boc-50 -Glu(OBzl)-ONP-t H-Asp(NH2 )-OBzl-lel kondenzálunk, majd a peptidből a Boc védőcsoportot eltávolítjuk. A vegyület vékonyrétegkromatografálás során kapott Rf-értéke 0,38. (Futtatószer: amilalkohol—piridin—víz 5:3:2 arányú elegye, adszor-55 bens: szilikagél). B.5. lépés: H-Glu(NH2 )-Asp(OBzl)-NR,R 2 • HCl (R,, R2 • = =• hidrogénatom vagy metilcsoport) 60 A B.l. lépésben megadott módon Boc-Glu(NH2 >ONP-t H-Asp(OBzl)-NR, R 2 -vei kondenzálunk, majd a Bot védőcsoportot eltávolítjuk. A vegyület vékonyrétegkromatografálás során kapott 65 Rf-értéke 0,34 (R[, R2 = hidrogénatom) illetve 4
