169156. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a vazopresszin 1-5 fragmentjét tartalmazó, pszichofarmakológiailag hatásos peptidek előállítására
9 169156 10 0,36 (Rí, R 2 = metilcsoport). A futtatásokat amilalkohol—piridin—viz 5:3:2 arányú elegyében végeztük, adszorbensként szilikagélt alkalmaztunk. B.6. lépés: 5 H-Glu(NH2 )-Asp(OBzl)-OR • HCl (R= -CH3 vagy -C n H 23 ) A B.l. lépésben megadott rrtódon Boc-Glu(NH2 )-ONP-t H-Asp(OBzl)-OR-rel kondenzálunk 10 (R = metilcsoport vagy CU H J3 csoport). Az átalakítás után a Boc védőcsoportot eltávolítjuk. Cl. lépés: H-Phe-Glu(NH2 )-Asp(NH 2 )-OH 15 A J. Am. Chem. Soc. 76 6202 (1954) közlemény szerint előállított Tos—Phe-Glu(NH2)-Asp(NH2 )-OH-ból 3,8g-ot feloldunk 100 ml száraz ammóniában, az oldathoz a kék szín fennmaradá- 2u sáig nátriumot adunk, az oldatot keverjük, majd ammóniumklorid hozzáadásával a kék színt megszüntetjük. Az ammóniát hagyjuk a levegőn elpárologni, a maradékot vízzel elegyítjük és éterrel extraháljuk. A vizes fázist liofilizáljuk. A párlási 2 s maradékot vízben oldjuk és az oldatot tiszta alkohollal hígítjuk. A kivált csapadékot szűréssel elkülönítjük és foszforpentoxid felett megszárítjuk. Ilyen módon 2,6 fenti terméket kapunk. A vegyület olvadáspontja 227 C° (bomlás közben), a vé- 30 konyrétegkromatografálás során kapott Rf-értéke 0,15. (Futtatószer: butanol—piridin-ecetsav—víz (4 : 3/4 :1/4 :1 arányú elegye, adszorbens: szilikagél)Peptidek C.3.1. H-Phe-Glu(OH)-Asp(OH)-OH C.3.2. H-Phe-Glu(OH)-Asp(NHCH3 )-OH C.3.3. H-Phe-Glu(OH)-Asp(NH2 )-OH C.3.4. H-Phe-Glu(NH2 )-Asp(OH)-NH 2 C.3.5. H-Phe-Glu(NH2 )-Asp(OH)-N(CH3 ) 2 C.3.6. H-Phe-Glu(NH2 )-Asp(OH)-OCH 3 C.3.7. H-Phe-Glu(NH2 )-Asp(OH)-OC 1 !H 23 D.I. lépés: Z-Cys(Bzl)-Tyr-Phe-Glu(NH2 )-Asp(NH 2 )-CH 55 1 g A.2. lépés szerint előállított Z-Cys(Bzl)-Tyr-OH-t feloldunk 10 ml tetrahidrofuránban, az oldathoz hozzáadunk 0,26 ml N-etilmorfolint, az oldatot -10C°-ra hűtjük és 0,26 g klórhangyasav-izobutil- 60 észtert adunk hozzá. Az adagolás után az elegyet 10 percen keresztül -10C°-on keverjük, 0,8 g Cl. példa szerint előállított H-Phe-Glu(NH2 > -Asp(NH2 )-OH-t és 0,26 g N-etilmorfolin 10 ml hűtött dimetilformamidban készített oldatát adjuk 65 C.2. lépés: H-Phe-Glu(NH2 )-Asp(OH)-OH 2,1 g Z-Phe-ONP-t feloldunk 25 ml etilacetátban, majd az oldathoz 2,4 g H-Glu(NH2 )-Asp(OBzl)-OBzl 10 ml dimetilformamidban készült oldatát adjuk. (Ezt a reagenst a B.l. példa szerint előállított termékből készítettük a bázis felszabadításával.) Az elegyet az adagolás után 20 órán keresztül 0 C°-on keverjük, a kivált csapadékot szűréssel elkülönítjük, száraz etilacetáttal mossuk és megszárítjuk. A vegyület olvadáspontja 170-173 C°, Rf-értéke 0,74. (Futtatószer: benzol—etanol 8 :2 arányú elegye, adszorbens: szilikagél.) Hozam: 82%. Az így előállított védett peptid 2,9 g-ját feloldjuk 35 ml jégecetben, az oldathoz 10%-os palládiumos csontszenet adunk és hidrogéngázt buborékoltatunk bele. Az oldószert bepárlással eltávolítjuk, a párlási maradékot vízzel elegyítjük és az elegyet liofilizáljuk. A termék Rf-értéke 0,14. (Futtatószer: amilalkohol—piridin—víz 5:3:2 arányú elegye, adszorbens: szilikagél.) Hozam: 98%. C.3. lépés A C.2. lépésben ismertetett módon Z-Phe-ONP-t B.2., B.3., B.4., B.5. és B.6. lépés szerint előállított peptidekkel kondenzálunk, majd a peptidekből a védőcsoportot eltávolítjuk. Ilyen módon az alábbi vegyületeket állíthatjuk elő 80% és 90% közötti hozammal: A peptidek Rf -értéke amilalkohol-piridin-víz 5:3:2 arányú elegyében végzett vékonyrétegkromatografálás során, szilikagélen 0,12 0,15 0,15 0,17 0,19 0,22 0,24 hozzá. A reakcióelegyet 30 percen keresztül —10C°-on, 2 órán keresztül 0 C°-on és 18 órán keresztül 20 C°-on keverjük, majd vízbe öntjük, a vizes elegy pH-ját 3—4-re állítjuk be, végül a kivált szilárd terméket centrifugálással eltávolítjuk. A fentiek szerint elkülönített vegyületet 1 :1 arányú etanol—víz elegyből kristályosítjuk át, az anyag olvadáspontja 219 C° (bomlás közben), Rf-értéke 0,44. (Futtatószer: butilalkohol-piridin—ecetsav—víz 4:3/5:1/4 :1 arányú elegye, adszorbens: szilikagél.) 1,4 g terméket kapunk. 5
