169156. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a vazopresszin 1-5 fragmentjét tartalmazó, pszichofarmakológiailag hatásos peptidek előállítására

5 169156 6 A találmány szerinti eljárással előállított (I) általános képletű peptidek és pepiid-származékok biológiai hatásának igazolására az alábbi vizsgálatokat ismertetjük: a) rúdugrás-teszt (aktív elkerülési vizsgálat) Körülbelül 125 g súlyú hím fehérpatkányokat feltételes reflex kialakításával rúdugrásra idomítottunk be. A reflexet kiváltó ingerként a ketrecet megvilágítottuk, majd a megvilágítás után 5 másodpercenként a ketrec padlóján levő állatokat elektromos impulzusokkal ingereltük. Három egymásután 10 következő nap 10 idomítási kísérletet végeztünk, az egyes kísérletek átlagosan 60 másodpercig tartottak. Az idomítási idő után 3 egymásutáni napon keresztül tanulmányoztuk a reflex felejtését. Azokat az állatokat, amelyek az első felejtés vizsgálatkor 8 vagy több választ adtak, a vizsgálat anyaggal vagy placeboval kezeltük. A kezelés után 24 és 48 órával ezekkel az állatokkal 10 kísérletből álló felejtésvizsgálatot végeztünk. A placebohoz viszonyított pozitív válaszok száma mértéke annak, hogy az adott vegyület a vizsgált állatnál a tanult anyag és viselkedés felejtését mennyire gátolta. Vegyület Tanulási periódus (összesen 30 kísérlet) patkányonként kapott válaszok száma átlagosan Patkányonként kapott válaszok száma átlagosan a 10 kísérletből álló sorozatban - a kezelés után — 24 órával 48 órával placebo F.l. példa szerint előállított pentapeptid dimer, 1 jug se. 15 16,5 b) passzív elkerülési teszt A kísérleti berendezés egy magasan elhelyezett patkány-kifutóból és a kifutóhoz ajtóval csatlakozó sötét ketrecből állt. A patkány-kifutót a kifutó középpontja felett kb. 40 cm magasan elhelyezett 40 W-os izzóval világítottuk meg. A sötét ketrec padlója fémrácsból készült, a rács kiképzése olyan volt, hogy a rácsba áramot bocsájtva a ketrecben tartózkodó patkányokat sokkolni lehetett. Az első kísérleti napon 180-200 g súlyú hím fehérpatkányokat helyeztünk 2 perc időtartamra külön-külön a kamrába. A következő kísérletben a patkányokat a magasra helyezett kifutóba tettük és 30 35 40 engedtük őket a guillotine-tipusú ajtón keresztül a sötét kamrába futni. A következő napon ezt az utóbbi kísérletet kétperces időközök hagyásával háromszor ismételtük meg. Az ezután következő napon a három egymást követő kísérletben a patkányok a kamrába jutás után közvetlenül elektromos sokkot kapták. A patkányokat ezután a vizsgálandó anyaggal kezeltük és a kezelés után 24 és 48 órával - elektromos sokk nélkül- megismételtük a fenti kísérletet. Feljegyeztük azt az időt, amikor a patkányt a kifutóra helyeztük és amikor a patkány bement az elsötétített ketrecbe. A patkányokat legfeljebb 300 másodpercig figyeltük. A három sokkolás A sokkolás utáni kísérletekben -előtti kísérletpatkányonként megfigyelt Vegyület Adag nél patkányonként közepes idő másodpercekben, Mg megfigyelt a kezelés után közepes idő másodpercekben 24 órával 48 órával placebo 1 3 11 5 lizin-vazopresszin 1 6 300 287 0,25 5 190 127 0,0625 5 13 8 F.l. példa szerint elő0,5 5 300 297 állított pentapeptid dimer 0,125 6 212 193 0,03125 6 36 25 A táblázatból látható, hogy a lizin-vazopresszin és a találmány szerinti eljárással előállított pentapeptid-dimer erősen gátolja a tanult reflexek és viselkedés felejtését. A dózisok összehasonlításából S5 megállapítható, hogy a peptid-dimer majdnem kétszer olyan hatásos, mint a lizin-vazopresszin. Az alábbiakban az oltalmi kör korlátozása nélkül példákat ismertetünk a találmány szerinti el-3