169136. lajstromszámú szabadalom • Eljárás dezoxi-amino-glükozidok előállítására amino-glükozidok dehidroxilezésével
19 169136 20 Optikai fajlagos forgatóképesség [a]p3 =4-108,6° (koncentráció: 0,53%, oldószer víz). Magmágneses rezonancia-spektrum (D2 O-ban felvéve): S ppm: 4,36 (3'-H, kvartett), 5,18 (1"-H, dublett), 5,78 (l'-H, dublett). Infravörös spektrum: !'m?5 = (cm"1 ) = 970 (foszfát). 1 térfogatrész víz és 1 térfogatrész etanol elegyében feloldunk 0,03 súlyrész 3'-klór-3'-dezoxi-kanamicin B-t, majd a kapott oldathoz 0,5 térfogatrész Raney-nikkelt adunk, és az elegyet hidrogénáramban atmoszférikus nyomáson és szobahőmérsékleten 3 órán át rázzuk. Ezután a katalizátort kiszűrjük, majd 50 térfogatrész 1 n vizes ammónium-hidroxid-oldattal mossuk. A mosófolyadékot a fenti szűrlettel egyesítjük, majd az így kapott elegyet bepároljuk. Ekkor 0,25 súlyrész nyers terméket kapunk por alakjában. A nyers terméket ezután 5 térfogatrész kationcserélőgyantán (Amberlite CG-50-NH/ ionokkal töltött állapotban) adszorbeáltatjuk, majd eluálással tisztítjuk, ahol az eluáláshoz 0 és 0,5 közötti normalitású ammónium-hidroxid-oldatokat használunk (gradiens-eluálás). így 0,02 súlyrész 3'-dezoxi-kanamicin B-t kapunk. A termék azonosnak bizonyult egy hiteles mintával. Vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálatban például az alábbi Rf értékeket kapjuk. 1. E, Merck cég által gyártott szilikagél-lap (Art. 5721) (üveglaplemez), futtatószer: a kloroform-metanol-17%-os arnmónium-hidroxid-oldat (2:1: 1) oldószerrendszer felső fázisa. 3'-klór-3'-dezoxi-kanamicin B : 0,78, 3'-dezoxi-kanamicin B: 0,74. 2. Eastman Kodak cég által gyártott szilikagél-lap (Chromagram 6060) (szintetikus gyantából készült alaplemez), futtatószer: a kloroform-metanol-tömény ammónium-hidroxid-oldat-víz (20 : 53 : 10 : 5) oldószerrendszer felső fázisa 3'-klór-3'-dezoxi-kanamicin B: 0,64, 3'-dezoxi-kanamicin B: 0,58. Optikai forgatóképesség [a]" =+123,2° (koncentráció: 1,085%, oldószer víz). Elemzési eredmények a Ci8 H 3 7N 5 09 • 2 H 2 0 képletre: számított: C =42,93%, H =8,20%, N= 13,90%, talált: C =42,11%, H =8,04%, N = 13,05%, A megfelelő trimetil-szilil-származék gázkromatográfiás retenciós ideje teljes mértékben megegyezik egy hiteles minta retenciós idejével. 5. példa 1,2 súlyrész kanamicin B-3'-foszfát-trihidrát, 0,8 súlyrész trifenil-foszfin, 10 térfogatrész trimetil-szilil-klorid, 4 térfogatrész hexametil-diszilazán és 4 térfogatrész piridin keverékét 48 órán át 130 C°-on hevítjük, majd a reakcióelegyhez jeges hűtés közben 200 térfogatrész metanolt adunk. A metanolos elegyet ezután csökkentett nyomáson 5 szárazra pároljuk^ majd a maradékot feloldjuk 300 térfogatrész desztillált vízben. Az így kapott vizes oldatot 120 térfogatrész metilén-kloriddal extraháljuk, majd a vizes fázist elkülönítjük és a még esetleg benne levő metilén-kloridot csökkentett 10 nyomáson eltávolítjuk. A vizes fázist ezután desztillált vízzel 500 térfogatrész össztérfogatra hígítjuk, majd az így kapott oldatot 400 térfogatrész kationcserélőgyantával (Amberlite IRC—50 — NH4 + ionokkal töltött állapotban) töltött oszlopra felvisszük. 15 Az oszlopot vízzel mossuk, majd 1400 téríogatrész 1 n vizes ammónium-hidroxid-oldattal eluáljuk. Az eluátumot csökkentett nyomáson mintegy 300 tér-' fogatrészre bepároljuk, majd a kapott koncentrátumot 160 térfogatrész kationcserélőgyantával 20 (Amberlite CG-50-NH4 + ionokkal töltött állapotban) töltött oszlopra felvisszük. Az oszlopot vízzel mossuk, majd 1200 térfogatrész desztillált vízzel és 1200 térfogatrész 0,3 n 25 vizes ammónium-hidroxid-oldattal eluáljuk (gradiens-eluálást alkalmazva). Az eluátumot csökkentett nyomáson bepároljuk és liofilizáljuk, amikor is 0,755 súlyrész 3'-klór-3'-dezoxi-kanamicin B-dihidrátot kapunk. 30 0,053 súlyrész 3'-klór-3'-dezoxi-kanamicin B 5 térfogatrész vízzel készült oldatához 0,3 térfogatrész Raney-nikkelt és 0,1 térfogatrész trietil-amint adunk, majd a kapott elegyet hidrogénáramban 4 órán át rázzuk. Ezután a katalizátort kiszűrjük, 35 majd 50 térfogatrész 1 n vizes ammónium-hidroxid-oldattal mossuk. A mosófolyadékot a fenti szűrlettel egyesítjük, majd a kapott elegyet bepároljuk. A kapott maradékot kromatografálással tisztítjuk kationcserélőgyantával (Amberlite CG-50 - NH4 40 ionokkal töltött állapotban) töltött oszlopot használva, amikor is 0,033 súlyrész 3'-dezoxi-kanamicin B-t kapunk. 45 6. példa 0,63 súly rész kanamicin B-3'-foszfát-trihidrát, 5 térfogatrész trimetil-szilil-klorid, 2 térfogatrész hexametil-diszilazán, 2 térfogatrész piridin, 0,4 súly-50 rész trifenil-foszfin és 0,1 súlyrész cink-klorid keverékét 100C°-on hevítjük 48 órán át, majd a reakcióelegyet a 4. példában ismertetett módon feldolgozzuk, így 0,425 súlyrész 3'-klór-3'-dezoxi-kanamicin B-t kapunk. 55 0,1 súlyrész 3'-klór-3'-dezoxi-kanamicin B 10 térfogatrész vízzel készült oldatához 0,3 súlyrész, szénhordozóra felvitt palládium-katalizátort (1% palládiumot tartalmaz) adunk, majd a reakcióelegyet hidrogénáramban keverjük. 5 óra elteltével 60 a katalizátort kiszűrjük és 50 térfogatrész 0,5 n sósavoldattal mossuk. A mosófolyadékot a fenti szűrlettel egyesítjük, majd a kapott elegyet eredeti térfogatának mintegy egyharmadára bepároljuk és ezt követően 1 n vizes ammónium-hidroxid-oldattal 65 semlegesítjük. 10
