169136. lajstromszámú szabadalom • Eljárás dezoxi-amino-glükozidok előállítására amino-glükozidok dehidroxilezésével
21 169136 22 A semlegesített oldatot először sómentesítjük kationcserélőgyantával (Amberlite IRC-50- NH4 + ionokkal töltött állapotban), majd 15 térfogatrész kationcserélőgyantával (Amberlite CG-5(j)I —. NH4 + ionokkal töltött állapotban) töltött oszlopon tisz- 5 títjuk. így 0,064 súlyrész 3'-dezoxi-kanamicin B-t kapunk. 7. példa 10 0,3 súlyrész paromomicin I-3'-foszfát-tetrahidrát, 2,7 térfogatrész trimetil-szilil-klorid, 1,2 térfogatrész hexametil-diszilazán, 2,25 térfogatrész vízmentes piridin és 0,21 súlyrész trifenil-foszfin keverékét olajfürdőn 48 órán át 110C°-on hevítjük, majd a 15 reakció befejeződése után a reakcióelegyet jeges hűtés közben 30 térfogatrész metanolba öntjük. A metanolos elegyet ezután csökkentett nyomáson szárazra pároljuk, majd a kapott maradékhoz 1,00 térfogatrész desztilláltvizet adunk, és az ekkor 20 képződő csapadékot kiszűrjük, majd 100 térfogatrész etil-acetáttal extraháljuk. A vizes fázist csökkentett nyomáson betöményítjük. A betöményített vizes fázist ezután 90 térfogatrész kationcserélőgyantával (Amberlite. IRC-50-NH,+ ionokkal töl- 25 tött állapotban) töltött oszlopra felvisszük. Az oszlopot először 500 térfogatrész desztilláltvízzel mossuk, majd 300 térfogatrész 1 n vizes ammónium-hidroxid-oldattal eluáljuk. Az eluátumot csökkentett nyomáson bepároljuk, 30 majd a kapott maradékot 50-térfogatrész desztillált vízben feloldjuk, és a vizes oldatot 30 térfogatrész kationcserélőgyantával (Amberlite CG—501 — NR/ ionokkal töltött állapotban) töltött oszlopra felvisszük. 35 Az oszlopot 100 térfogatrész desztillált vízzel mossuk, majd 0 és 0,3 közötti normalitású ammónium-hidroxid-oldatokkal eluáljuk (gradiens-eluálás). Az így kapott nyers terméket ismételten kation- 40 cserélőgyantán (Amberlite CG-50 — NH4 + ionokkal töltött állapotban) adszorbeáltatjuk, majd a gyantát 0 és 0,3 közötti normalitású vizes ammónium-hidroxid-oldatokkal eluáljuk (gradiens-eluálás). A 3'-klór-3'-dezoxi-paromomicin I-t tartalmazó frak- 45 ciókat egyesítjük, majd csökkentett nyomáson bepároljuk. A koncentrátumot ezután liofilizáljuk, amikor is 0,202 súlyrész 3'-klór-3'-dezoxi-paromomicin I-dihidrátot kapunk. Elemzési eredmények a C23 H 44 N s Oi 3 Cl • 50 • 2 H2 0 képletre: számított: C =41,22%, H = 7,22%, N = 10,45%, Cl = 5,29%, talált: C =40,97%, H = 7,09%, 55 N =10,73%, Cl =5,03%. Vékonyréteg-kromatográfiás Rf érték: 0,55 (lemez: Merck Art. 5721). Paromomicin I (szabad): 0,41. (Futtatószerként a kloroform : metanol : vizes 60 ammónium-hidroxid-oldat : víz = 1 : 4 : 2 :1 oldószerrendszert használjuk). A kiindulási anyagként -használt paromomicin I-3'-foszfát-tetrahidrátot a Journal of Antibiotics, 21, 22 (1968) irodalmi helyen ismertetett módszer- 65 hez hasonló módon állítjuk elő, azaz a paromomicin I-re az Escherichia coli K 12 ML nyers enzim-oldatát hatni hagyjuk. Elemzési eredmények a C2 3H 46 N s Oi 7 P • • 4H2 0 képletre: számított: C = 35,98%, H = 7,09%, N = 9,12%, talált: C = 35,85%, H = 7,02%, N = 8,85%. Optikai forgatóképesség [<*]D4 = +59,3° (koncentráció: 1,01%, oldószer víz). Ultraibolya spektrum: nincs specifikus abszorpció. Infravörös spektrum:,X max (cm"1) =960. A termék Rf értéke 0,46 vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálatban szilikagél-üveglapot (Merck — Art. 5721) használva olyan oldószereleggyel, amely a kloroform : metanol : vizes ammónium-hidroxid-oldat : víz (4:3:2:1) oldószerrendszer felső fázisából 5 térfogatrészt és 3 térfogatrész metanolt tartalmaz. A kontrollanyagként használt szabad paramomicin I Rf értéke ugyanilyen mérési körülmények között 0,19. 0,1 súlyrész 3'-klór-3'-dezoxi-paromomicin I 20 térfogatrész vízzel készült oldatához 0,3 térfogatrész Raney-nikkelt és 0,5 térfogatrész trietil-amint adunk, majd a kapott elegyet hidrogénáramban atmoszférikus nyomáson és szobahőmérsékleten rázzuk 4 órán át. Ezután a katalizátort kiszűrjük és 100 térfogatrész 1 n vizes ammóniurn-hidroxid-oldattal alaposan mossuk. A mosófolyadékot a fenti szűrlettel egyesítjük, majd a kapott elegyet szárazra pároljuk. így por alakjában 0,091 súlyrész nyers terméket kapunk. A nyers terméket feloldjuk 20 térfogatrész desztillált vízben, majd a vizes oldatot 35 térfogatrész kationcserélőgyantával (Amberlite CG-50I-NH/ ionokkal töltött állapotban) töltött oszlopra felvisszük. Az oszlopot 0 és 0,5 közötti normalitású vizes ammónium-hidroxid-oldatökkal eluáljuk (gradiens-eluálás). A kapott frakciókat csökkentett nyomáson szárazra pároljuk, amikor is 0,07 súlyrész 3'-dezoxi-paromomicin I-dihidrátot kapunk. Elemzési eredmények a C2 3H 45 N 5 Oi3 • 2H 2 0 képletre: számított: C =43,45%, H =7,76%, N =11,01%, talált: C =43,29%, H = 7,65%, N = 10,91%. Vékonyréteg-kromatográfiás Rf érték: 0,47 (lemez: Merck — Art. 5721). Kontrollanyag (paromomicin I) Rf értéke: 0,41 (futtatószerként kloroform : metanol : vizes ammónium-hidroxid-oldat : víz = 1 :4 : 2 :1 oldószerrendszert használjuk). 8. példa 0,6 súlyrész ribosztamicin-5"-foszfát-dihic1 rát, 0,6 súlyrész trifenil-foszfin, 5 térfogatrész trimetil-szilil-klorid, 2 térfogatrész hexametil-diszilazán, 2 térfogatrész vízmentes piridin és 0,3 súlyrész cink-klorid keverékét 110C°-on hevítjük 48 órán 11
