169136. lajstromszámú szabadalom • Eljárás dezoxi-amino-glükozidok előállítására amino-glükozidok dehidroxilezésével
17 169136 18 Elemzési képletre: eredmények a C12 H 26 0 9 N 4 P< : számított: talált: C =31,65%, N = 12,30%, C =31,78%, N = 12,09%, H = 7,08%, P =6,80%, H =7,22%, P =6,81%. 3H,0 Ultraibolya spektrum: nincs specifikus abszorpció. Magmágneses rezonancia-spektrum (D2 O-ban felvéve) S: 3,14 (2'-H), 4,01 (3'-H) és 5,78 (1H, dublett,"j = 4Hz, 1-H). Infravörös spektrum: ^ax (cm-1 ) = 965. Fajlagos forgatóképesség [a]" =+95,17° (koncentráció: 1,01%, oldószer víz). 10 térfogatrész vízben feloldunk 0,15 súlyrész 3'-klór-3'-dezoxi-neomicin A-t, majd a kapott oldathoz 1,8 térfogatrész Raney-nikkelt és 0,2 súlyrész trietil-amint adunk, és a kapott elegyet hidrogénáramban atmoszférikus nyomáson és szobahőmérsékleten rázzuk 5 órán át. Ezután a katalizátort kiszűrjük, majd 200 térfogatrész 1 n ammónium-hidroxid-oldattal mossuk. A mosófolyadékot a fenti szűrlettel egyesítjük, majd az így kapott elegyet betöményítjük, és az oldhatatlan anyagokat kiszűrjük. A szűrletet ezután 30 ml kationcserélőgyantával (Amberlite CG-50I-NH/ ionokkal töltött állapotban) töltött oszlopra felvisszük. Az oszlopot vízzel mossuk, majd 0,1 és 0,5 közötti normalitású ammónium-hidroxid-oldatokkal eluáljuk (gradiens-eluálás) és tisztítjuk. így 0,12 súlyrész 3'-dezoxi-neomicin A-monohidrátot kapunk. Elemzési eredmények a C12H26N4O5 • H20 képletre: számított: C =44,43%, N = 17,27%, . H = 8,69%, talált: C =44,12%, N = 16,98%. H =8,53%, 10 15 20 25 30 35 fogatrész desztillált vízzel mossuk, majd 1000 térfogatrész 1 n vizes ammónium-hidroxid-oldattal eluáljuk. Az eluátumot csökkentett nyomáson szárazra pároljuk, amikor is 0,12 súlyrész nyers terméket kapunk. Ezt feloldjuk 50 térfogatrész desztillált vízben, majd 30 térfogatrész kationcserélőgyantával (Amberlite CG-50-NH4 + ionokkal töltött állapotban) adszorbeál tatjuk. A gyantát 100 térfogatrész desztillált vízzel mossuk, majd 0 és 0,5 közötti normalitású vizes ammónium-hidroxid-oldatokkal eluáljuk (gradiens-eluálás). Az így kapott nyers terméket ismételten adszorbeáltatjuk kationcserélőgyantán (Amberlite CG-50-NH/ ionokkal töltött állapotban). A gyantát 0 és 0,5 közötti normalitású vizes ammónium-hidroxid-oldatokkal eluáljuk (gradiens-eluálás). Az így tisztított terméket liofilizáljuk. A fenti módon 0,082 súlyrész 3'-klór-3'-dezoxi-kanamicin B-monohidrátot kapunk. Elemzési eredmények a Ci8 H3 8 N 5 OioCl • H 2 0 képletre: 40 45 50 A termék Rf értéke 0,35 vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálatban szilikagél-üveglapot (Chromagram 6060 - Eastman Kodak) használva olyan oldószereleggyel, amely kloroform : metanol: vizes ammónium-hidroxid-oldat : víz (4:3:2:1) oldószerrendszer felső fázisának 5 térfogatrészéből és 3 térfogatrész metanolból áll. A kontrollanyagként használt szabad neomicin A Rf értéke ugyanilyen mérési körülmények között 0,30. 4. példa 0,15 súlyrész kanamicin B-3'-foszfát-trihidrát, 7,5 térfogatrész trimetil-szilil-klorid, 15,0 térfogat- 55 rész hexametil-diszilazán és 7,5 térfogatrész vízmentes piridin keverékét 130 C°-on hevítjük 62 órán át olajfürdőn, majd a reakció befejeződése után a reakcióelegyhez jeges hűtés közben metanolt adunk. Ezután a reakcióelegyet csökkentett nyo- 60 máson bepároljuk, majd a maradékhoz 100 térfogatrész desztillált vizet adunk. Az így kapott elegyet felvisszük 200 térfogatrész kationcser élőgyantával (Amberlite IRC-50-NH4 + ionokkal töltött állapotban) töltött oszlopra. Az oszlopot 1000 tér- 65 számított: C =41,57%, H = 7,36%, N =13,46%, Cl = 6,81%, talált: C =41,45%, H = 7,56%, N = 12,88%, Cl = 6,64%. Fajlagos forgatóképesség [a]p3 =+106,5° (koncentráció: 0,51%, oldószer víz). A termék Rf értéke 0,55 vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálatban szilikagél-üveglapot (Merck — Art. 5721) használva olyan oldószereleggyel, amely kloroform : metanol : víz : vizes ammónium-hidroxid-oldat (2,0:1,5:0,5:1,0) oldószerrendszer felső fázisából 1 térfogatrészt és 1 térfogatrész metanolt tartalmaz. A kontrollanyagként használt szabad kanamicin B, illetve kanamicin B-3'-foszfát Rf értéke ugyanilyen mérési körülmények között 0,39, illetve 0,25. Magmágneses rezonancia-spektrum (D2 O-ban felvéve): ppm 5,44(1 H, dublett, 1^2. = 3 Hz, C,— H), 3,33 (1H, kvadruplett, Jj>2 > = 3 Hz, J2\3' = 10 Hz, C2 .-H). A fenti termék további pontos elemzési adatainak megállapítására a terméket acetilezzük és szililezzük, amikor is penta-N-acetil-penta-0-trimetil-szilil-kanamicin-B-3'-foszfátot kapunk, amelynek megállapítjuk a tömegspektrumát. Jellemző csúcsok: 1056 (M-l5), 1035 (M-36), 1020 (M-51), 838, 810, 689, 645, 599, 420, 361, 299. A kiindulási anyagként használt kanamicin B-3'-foszfát-trihidrátot az Applied Microbiology, 16, 9. szám, 1276 (1968) irodalmi helyen ismertetett módszerhez hasonló módon állítjuk elő úgy, hogy a kanamicin B-re a Pseuduomonas aeruginosa R34R (FERM-P No. 2124) mikroorganizmus nyers enzim-oldatát hatni hagyjuk. Elemzési eredmények, a Ci8 H3 8 N50 13 P • • 3 H2 0 képletre: számított: C = 35,00%, H = 7,18%, N =11,34%, P =5,01%, talált: C =35,23%, H = 7,06%, N = 10,99%, P =5,06%. 9
