169136. lajstromszámú szabadalom • Eljárás dezoxi-amino-glükozidok előállítására amino-glükozidok dehidroxilezésével
15 169136 16 Elemzési eredmények a C23H 47 N 6 Oi 6 P • • 5 H2 0 képletre: számított: C =35,20%, H =7,32%, N = 10,70%, talált: C = 35,26%, H = 7,05%, N = 10,17%. Ultraibolya spektrum: nincs specifikus abszorpció. Ifo,£Br (cm-»):958. 1Q A termék Rf értéke 0,35 vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálatban szilikagél-üveglapot (Merck — Art. 5721) használva olyan oldószereleggyel, amely kloroform : metanol : vizes ammónium-hidroxid-oldat : víz (4:3:2:1) oldószerrendszer felső fázisa- 15 nak 5 térfogatrészéből és 3 térfogatrész metanolból áll. A kontrollanyagként használt szabad neomicin B Rf értéke ugyanilyen kísérleti körülmények között 0,11. 15 térfogatrész vízben feloldunk 0,1 súlyrész 20 3'-klór-3'-dezoxi-neomicin B-t, majd az oldathoz 0,3 térfogatrész Raney-nikkelt és 0,5 térfogatrész trietil-amint adunk, és a kapott elegyet nitrogénáramban szobahőmérsékleten és atmoszférikus nyomáson rázzuk 4 órán át. Ezt követően a katali- 25 zátort kiszűrjük, majd a katalizátort 100 térfogatrész 1 n vizes arnmónium-hidroxid-oldattal alaposan kimossuk, és a mosófolyadékot a fenti szűrlettel egyesítjük. A kapott elegyet bepároljuk, amikor is 0,085 súlyrész nyers port kapunk. A nyers termé- 30 ket 20 térfogatrész desztillált vízben feloldjuk, majd a kapott oldatot 35 térfogatrész kationcserélőgyantával (Amberlite CG-50I - NH,+ ionokkal töltött állapotban) töltött oszlopra felvisszük. Az oszlopot 0 és 0,5 közötti normalitású ammónium- 35 -hidroxid-oldatokkal eluáljuk (gradiens-eluálás), majd a kapott eluátumot csökkentett nyomáson betöményítjük és liofilizáljuk. így 0,06 súlyrész 3'-dezoxi-neomicin B-dihidrátot kapunk. Elemzési eredmények a C23 H 46 N 6 0 12 *2H 2 0 40 képletre: számított: C = 43,52%, H = 7,94%, N = 13,24%, tálait: C = 43,67%, H = 7,75%, 45 N = 13,05%. A termék Rf értéke 0,36 vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálatban szilikagél-üveglapot (Merck — Art. 5721) használva olyan oldószereleggyel, amely- 50 nek összetétele kloroform : metanol : vizes ammónium-hidroxid-oldat :víz (1:4:2:1). A kontrollanyagként alkalmazott neomicin B Rf értéke ugyanilyen mérési körülmények között 0,29. 3. példa 0,1 súlyrész neomicin A-3'-foszfát-trihidrát, 3 térfogatrész trimetil-szilil-klorid, 3 térfogatrész bisz(tri- 60 metil-szilil)-acetamid és 3 térfogatrész vízmentes piridin keverékét olajfürdőn 15 órán át hevítjük 130C°-on, majd a reakcióelegyhez jeges hűtés közben metanolt adunk. Ezután a reakcióelegyet csökkentett nyomáson bepároljuk, majd a maradékot 65 feloldjuk 50 térfogatrész desztillált vízben, és a kapott vizes oldatot 50 térfogatrész kationcserélőgyantával (Amberlite IRC-50 - NH4 + ionokkal töltött állapotban) töltött oszlopra felvisszük. Az oszlopot 100 térfogatrész desztillált vízzel mossuk, majd 200 térfogatrész 0,5 n vizes ammónium-hidroxid-oldattal eluáljuk. Az eluátumot csökkentett nyomáson 20 térfogatrészre bepároljuk, majd a koncentrátum pH-értékét pH 7,0 értékre beállítjuk és 20 térfogatrész kationcserélőgyantán (Amberlite CG-50-NH4 + ionokkal töltött állapotban) adszorbeáltatjuk. A gyantát ezt követően 0,075 n vizes arnmónium-hidroxid-oldattal eluáljuk, majd áz így kapott nyers terméket ismételten adszorbeáltatjuk 20 térfogatrész kationcserélőgyantával (Amberlite CG-50 - NH4 + ionokkal töltött állapotban) töltött oszlopon. Az oszlopot ezután 0,075 n vizes arnmónium-hidroxid-oldattal eluáljuk, majd az így tisztított terméket liofilizáljuk. így 0,035 súlyrész 3'-klór-3'-dezoxi-neomicin A-t kapunk. Elemzési eredmények a Ci2 H 25 N 4 0sCl képletre : számított: C =42,29%, H = 7,39%, N = 16,44%, Cl = 10,40%, talált: C =41,98%, H = 7,13%, N = 16,40%, Cl = 10,12%. Magmágneses rezonancia-spektrum (D2 O-ban felvéve): 5 ppm 5,47 (1H, dublett, J l',2' = 3Hz, C l'-H), 3,21 (1H, kvadruplett, J l',2' = 3Hz, J 2',3' = 11 Hz, C 2'-H). A termék Rf értéke 0,43 vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálatban szilikagél-üveglemezt (Chromagram 6060 márkanévvel az Eastman Kodak Amerikai Egyesült Államok-beli cég gyártja) használva olyan oldószereleggyel, amely kloroform: metanol : víz : vizes ammónium-hidroxid-oldat (2,0:1,5:0,5:1,0) oldószerrendszer felső fázisának 1 térfogatrészéből és 1 térfogatrész metanolból áll. A kontrollanyagként használt neomicin A, illetve neomicin-A-3'-foszfát Rf értéke ugyanilyen mérési körülmények között 0,28, illetve 0,21. A fenti termék további pontos elemzési eredményeinek megállapítására a terméket acetilezzük és szililezzük, amikor is tetra-N-acetil-tri-O-trimetil-szilil-neomicin-A-3'-foszfátot kapunk. Az utóbbi vegyületnek megállapítjuk a tömegspektrumát. Jellemző csúcsok: 711 (M+ -CH 3 ) (C1 S7 ), 709 (M + -CH 3 ) (Cl 35 ), 673 (M+ -CH 3 -HC1), 491, 463, 445, 419, 373, 355, 337 és 299. A kiindulási vegyületként használt neomicin-A-3'-foszfát-trihidrátot a Journal of Antibiotics, 21, l.szám, 22-29 (1968) irodalmi helyen ismertetett módszerhez hasonló módon állítjuk elő úgy, hogy a neomicin A-t az Escherichia coli K 12 ML 1629 mikroorganizmus nyers enzim-oldata hatásának tesszük ki. 8
