169136. lajstromszámú szabadalom • Eljárás dezoxi-amino-glükozidok előállítására amino-glükozidok dehidroxilezésével
23 169136 24 át, majd a reakció befejezése után 150 térfogatrész metanolt adunk a reakcióelegyhez jeges hűtés közben. Ezt követően a metanolos elegyet csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A kapott maradékot 150 térfogatrész desztillált víz és 150 térfogatrész etil-acetát elegyével rázzuk, majd a vizes fázist elválasztjuk. A vizes fázist ezután felvisszük 150 térfogatrész kationcserélőgyantával (Amberlite lRC-50-NH4 + ionokkal töltött állapotban) töltött oszlopra. Az oszlopot először 1500 térfogatrész desztillált vízzel mossuk, majd 1200 térfogatrész 1 n vizes ammónium-hidroxid-oldattal eluáljuk. Az eluátumot csökkentett nyomáson mintegy 300 térfogatrészre betöményítjük, majd a kapott koncentrátumot 165 térfogatrész kationcserélőgyantával (Amberlite CG-50 - NH4 + ionokkal töltött állapotban) töltött oszlopra felvisszük. Az oszlopot 1000 térfogatrész desztillált vízzel mossuk, majd 1000 térfogatrész 0 és 0,3 közötti normalitású vizes ammónium-hidroxid-oldatokkal eluáljuk (gradiens-eluálás). A kapott frakciókat egyesítjük, majd szárazra pároljuk és liofilizáljuk, amikor is 0,247 súlyrész 5"-klór-5"-dezoxi-ribosztamicin-monohidrátot kapunk. Elemzési eredmények a C17 H3sN4 09 Cl • 2H2 0 képletre: számított: C =41,59% H =7,18%, N =11,41%, Cl = 7,22%, talált: C =41,43%, H = 7,35%, N =11,25%, Cl = 7,03%. számított: C =35,79%, H = 6,89%, N = 9,82%, P =5,43%, talált: C =35,79%, H = 6,87%, N =9,82%, P =5,10%. Ultraibolya spektrum: nincs specifikus abszorp-10 15 20 25 30 A termék Rf értéke 0,31 vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálatban szilikagél-üveglapon (Merck Art. 35 5721) olyan oldószereleggyel, amely a kloroform: : metanol : vizes ammónium-hidroxid-oldat : víz (4:3:2:1) oldószerrendszer felső fázisából 5 térfogatrészt és 3 térfogatrész metanolt, tartalmaz. A kontrollanyagként alkalmazott szabad ribosztamicin 40 Rf értéke ugyanilyen mérési körülmények között 0,24. Á kiindulási anyagként alkalmazott ribosztamicin-5"-foszfátdihidrátot az Applied Microbiology, 16, 1276 (1968) irodalmi helyen ismertetett módszerhez hasonló módon állítjuk elő úgy, hogy a ribosztamicinre a Pseudomonas aeruginosa R34R (FERM-P No. 2124) nyers enzim-oldatát hatni hagyjuk. Elemzési eredmények a C17H35N4O13P • • 2H20 képletre: 45 50 55 CIO. Infravörös spektrum: X£]^ (cm-1 ) =962. 60 Optikai forgatóképesség [a]^4 = +33,3° (koncentráció: 0,600%, oldószer víz). A termék Rf értéke 0,25 vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálatban szilikagél-üveglapot (Merck Art. 5721) használva olyan oldószereleggyel, amely klo- 65 roform : metanol : vizes ammónium-hidroxid-oldat: :víz (4:3:2:1) felső fázisából 5 térfogatrészt és 3 térfogatrész metanolt tartalmaz. A kontrollanyagként használt szabad ribosztamicin Rf értéke ugyanilyen mérési körülmények között 0,24. Tetra-N-acetil-ribosztamicin-5"-foszfát-dihidrát azonosítása: Elemzések a C^Ii^^O^P • 2 H2 0 képletre: számított: C = 39,68%, H = 6,53%, N = 7,40%, P =4,09%, talált: C =39,20%, H = 6,52%, N = 7,29%, P =4,07%. 0,15 súlyrész 5"-klór-5"-dezoxi-ri'bosztamicin 15 térfogatrész vízzel készült oldatához 2 térfogatrész Raney-nikkelt és 0,25 térfogatrész trietil-amint adunk, majd a kapott elegyet hidrogénáramban atmoszférikus nyomáson és szobahőmérsékleten rázzuk 7 órán át. Ezt követően a katalizátort kiszűrjük és 150 térfogatrész 1 n vizes ammónium-hidroxid-oldattal alaposan mossuk. Ezután a mosóoldatot a fenti szűrlettel elegyítjük, majd az így kapott elegyet mintegy 15 térfogatrésznyi térfogatra betöményítjük. Az akkor képződött csapadékot kiszűrjük. A szűrletet 30 térfogatrész kationcserélőgyantával (Amberlite CG—50 — NH4 + ionokkal töltött állapotban) töltött oszlopra felvisszük, majd az oszlopot vízzel mossuk és ezt követően 0 és 0,3 közötti normalitású ammónium-hidroxid-oldattal eluáljuk (gradiens-eluálás). A kapott frakciókat ezután egyesítjük, majd csökkentett nyomáson bepároljuk, amikor is 0,081 súlyrész 5"-dezoxi-ribosztamicin-dihidrátot kapunk. Elemzési eredmények a C17H34O9N4 • 2H20 képletre: számított: C =43,03%, N =11,81%, H = 8,07%, taláU: C =43,07%, N =11,51%. H = 7,89%, A termék Rf értéke 0,32 vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálatban szilikagél-üveglapot (Merck Art. 5721) használva olyan oldószereleggyel, amely a kloroform : metanol : vizes ammónium-hidroxid-oldat : víz (4:3:2:1) oldószerrendszer felső fázisából 5 térfogatrészt és 3 térfogatrész metanolt tartalmaz. A kontrollanyagként használt szabad ribosztamicin Rf értéke ugyanilyen mérési körülmények között 0,24. Magmágneses rezonancia-spektrum (D2 0-ban felvéve): 5 ppm: 1,49 (3H, dublett, J = 5 Hz, -CH3 ). 9. példa 0,5 súlyrész ribosztamicin-3'-foszfát-trihidrát, 2,7 térfogatrész trimetil-szilil-klorid, 1,2 térfogatrész hexametil-diszilazán, 2,25 térfpgatrész vízmentes piridin és 0,21 térfogatrész trifenil-foszfin keverékét olajfürdőn 44 órán át hevítjük 100-110 C°-on, majd a reakció befejeződése után a reakcióelegyhez jeges hűtés közben 30 térfogatrész metanolt adunk. 12
