169136. lajstromszámú szabadalom • Eljárás dezoxi-amino-glükozidok előállítására amino-glükozidok dehidroxilezésével
25 169136 26 A metanolos elegyet ezt követően csökkentett nyomáson bepároljuk. A maradékot 100 térfogatrész desztillált víz és 100 térfogatrész etil-acetát elegyével rázzuk, majd a vizes fázist elválasztjuk, betöményítjük és 90 térfogatrész kationcserélőgyantával 5 (Amberlite IRC-50-NH4+ ionokkal töltött állapotban) töltött oszlopra felvisszük. Az oszlopot 500 térfogatrész desztillált vízzel mossuk, majd 300 térfqgatrész 1 n vizes ammónium-hidroxid-oldattal eluáljuk. Az eluátumot csökkentett nyomáson 10 szárazra pároljuk, amikor is 0,239 súlyrész nyers terméket kapunk. Ezt feloldjuk 50 térfogatrész desztillált • vízbén majd a kapott oldatot 30 térfogatrész kationcserélőgyantával (Amberlite CG-50I - NH4 + ionokkal töltött állapotban) töl- 15 tött oszlopra felvisszük. Az oszlopot 100 térfogatrész desztillált vízzel mossuk, majd 0 és 0,3 közötti normalitású vizes ammónium-hidroxid-oldatokkal eluáljuk (gradiens-eluálás). Az így kapott nyers terméket ismételten 20 felvisszük 20 térfogatrész kationcserélőgyantával (Amberlite CG-50 - NH4 + ionokkal töltött állapotban) töltött oszlopra. A kapott frakciókat ezután egyesítjük és az így kapott elegyet csökkentett nyomáson betöményítjük, majd liofilizáljuk, 25 amikor is 0,191 súlyrész 3'-klór-3'-dezoxi-ribosztamicin-monohidrátot kapunk. Elemzési eredmények a képletre: számított: talált: C =41,59%, N =11,41%, C =41,63%, N =11,35%, C17 H 33 N 4 0 9 C1-H 2 0 H =7,18%, Cl = 7,22%, H =7,10%, Cl =7,01%. A termék Rf értéke 0,56 vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálatban szilikagél-üveglapot (Merck Art. 5721) használva olyan oldószereleggyel, amely a kloroform : metanol : vizes ammónium-hídroxid-oldat : víz (4:3:2:1) oldószerrendszer felső fázisából 5 térfogatrészt és 3 térfogatrész metanolt tartalmaz. A kontrollanyagként használt szabad ribosztamicin Rf értéke ugyanilyen mérési körülmények között 0,24. Tetera-N-acetil-ribosztamicin-3'-foszfát-dihidrát azonosítási adatai: Elemzési eredmények a C25 H 43 N 4 0 17 P • • 2H2 0 képletre: számított: C =40,65%, H =6,41%, N = 7,59%, P =4,19%, talált: C =40,84%, H =6,46%, N = 7,79%, P =4,30%. 30 35 Optikai forgatóképesség [Ö]D4 = +36,8° (koncentráció: 0,38%, oldószer víz). A termék Rf értéke 0,29 vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálatban szilikagél-üveglemezt (Merck Art. 5721) használva olyan oldószereleggyel, amely a 40 kloroform : metanol : vizes ammónium-hidroxid-oldat : víz (4:3:2:1) oldószérrendszer felső fázisából 5 térfogatrészt és 3 térfogatrész metanolt tartalmaz. A kontrollanyagként használt szabad ribosztamicin Rf értéke ugyanilyen mérési körül- 45 menyek között 0,24. A kiindulási anyagként használt ribosztamicin-3'-foszfát-trihidrátot a Journal of Antibiotics, 21, 22 (1968) irodalmi helyen ismertetett módszerhez hasonló módon állítjuk elő úgy, hogy a riboszta- 50 micinre az Escherichia coli JR66/W677 mikroorganizmus nyers enzim-oldatát hatni hagyjuk. Elemzési eredmények a C^Hssl^O^P • • 3 H2 0 képletre: 0,1 súlyrész 3'-klór-3'-dezoxi-riboszfamicin 15 térfogatrész vízzel készült oldatához 0,3 térfogatrész Raney-nikkelt adunk, majd a kapott elegyet hidrogénáramban atmoszférikus nyomáson és szobahőmérsékleten rázzuk 4 órán át. Ezt követően a katalizátort kiszűrjük, majd 100 térfogatrész In vizes ammónium-hidroxid-oldattal alaposan mossuk. A mosóoldatot a fenti szűrlettel egyesítjük, majd a kapott elegyet bepároljuk, amikor is por alakjában 0,09 súlyrész nyers terméket kapunk. Ezt feloldjuk 20 térfogatrész desztillált vízben, majd a kapott vizes oldatot 35 térfogatrész kationcserélőgyantával (Amberlite CG-50I-NH/ ionokkal töltött állapotban) töltött oszlopra felvisszük. Az oszlopot 0 és 0,5 közötti normalitású vizes ammónium-hidroxid-oldatokkal eluáljuk (gradiens-eluálás). A kapott frakciókat egyesítjük, csökkentett nyomáson betöményítjük és liofilizáljuk, amikor is 0,068 súlyrész 3'-dezoxi-ribosztamicint kapunk. Elemzési eredmények a Cj 7H34 N 4 09 • H 2 0 képletre: számított: C =44,72%, N =12,27%, H = 7,94% talált: C =44,51%, H = 8,08% N = 12,19%. 55 számított: talált: C =34,69%, N = 9,52%, C =34,79%, N = 9,31%, H =7,02%, P =5,26%, H = 6,86%, P =5,05%. 60 Ultraibolya spektrum: nincs specifikus abszorpció. Optikai forgatóképesség [a]o = +46,8 (koncentráció: 0,635%, oldószer víz). Infravörös spektrum: Xmfx (cm-1 ) = 955. 65 Optikai forgatóképesség: [ájp4 =+30,2° (koncentráció: 0,605%, oldószer víz). A termék Rf értéke 0,29 vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálatban szilikagél-üveglapot (Merck Art. 5721) használva olyan oldószereleggyel, amely a kloroform : metanol : vizes ammónium-hidroxid-oldat: víz (4:3:2:1) oldószerrendszer felső fázisából 5 térfogatrészt és 3 térfogatrész metanolt tartalmaz. A kontrollanyagként használt szabad ribosztamicin Rf értéke ugyanilyen mérési körülmények között 0,24. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás dezoxi-amino-glükozid antibiotikumok előállítására amino-glükozid antibiotikumok dehidroxilezése útján, azzal jellemezve, hogy egy foszforilezett amino-glükozid antibiotikum funkciós cso-13
