168890. lajstromszámú szabadalom • Eljárás pszichofarmakológiailag hatásos peptidek előállítására
168890 15 16 az oldatot éterrel hígítjuk. A kivált csapadékot kiszűrjük. 0,41 g 93-95 C°-on olvadó vegyületet kapunk, amelyet ezután 20 ml 90%-os trifluorecetsavban oldunk. Az oldatot 1 órán át állni hagyjuk, majd az oldószert vákuumban lepároljuk, A maradékot éterrel eldörzsöljük és éjszakán át szilárd káliumhidroxid fölött szárítjuk. A kapott vegyület trifluoracetát-csoportját acetát-csoportra cseréljük úgy, hogy a peptid 1 : 1 arányú terc-butanol-víz eleggyel készített oldatához pH = 5,4 érték eléréséig acetát-formájú iJqwex X-8 ioncserélő gyantát adunk. Az elegyei szűrjük, és a szűrletet liofilizáljuk. Csaknem fehér, por alakú, tiszta H-(a-Me)Ala-Glu-His-NH2 -t kapunk, R f = 0,20 (szilikagél-rétegen, 4 : 0,75 : 0,25 : 1 arányú butanol-piridin-ecetsav-víz elegyben). Hozam: 85%. B) Ha a fenti eljárásban ammóniagáz helyett dimetilamint vagy etilamint használunk, a megfelelő N,N-dimetil- vagy N-etil-peptid-amidot kapunk. Az N,N-dimetil-peptid-amid Rf-értéke: 0,28, az N-etil-peptid-amid Rf-értéke: 0,26. (Butanol-piridin-ecetsav-víz 4:3/4:1/4:1 elegyben). 5. példa D-Met-Glu-His-Phe-peptid-származékok előállítása A) Z-Glu(OtBu)-His-Phe-OMe 9,76 g Z-Glu(OtBu)-His-N2 H 3 30 ml dimetilformamiddal készített, 0 C°-os oldatához 14,4 ml 4,8 n tetrahidrofurános sósavoldatot adunk. Az oldatot -20 C°-ra hűtjük, és 3,24 g izoamilnitritet csepegtetünk hozzá. Az oldatot 7 percig keverjük, majd az elegyet 4,32 g H-Phe-OMe • HCl 40 ml dimetilformamiddal és 12,6 ml trietilaminnal készített, 0 C°-ra hűtött oldatához adjuk. A reakcióelegyet 3 napon át 0 C°-on állni hagyjuk, majd szűrjük. A szűrletet etilacetát—víz eleggyel elegyítjük. A szerves fázist egymás után vízzel, vizes nátriumhidrogénkarbonát-oldattal és ismét vízzel mossuk, szárítjuk, és az oldószert vákuumban lepároljuk. A maradékot forró etilacetátból átkristályosítjuk. 183 C°-on olvadó terméket kapunk, [aß5 =-21° (c=l, dimetilformamidban). R f = 0,81 (szilikagél-rétegen, 8:2 arányú benzol-etanol elegyben). Hozam: 72%. B) Z-Glu-(OtBu)-His-Phe-OH Az A) lépésben kapott Z-Glu(OtBu)-His-N3 teljes mennyiségéhez 3,3 g fenilalanin és 12,6 ml trietilamin 15 ml dimetilformamiddal készített, 0C°-os oldatát adjuk. Az elegyet 3 napon át 0 C°-on állni hagyjuk, majd szűrjük. A szűrletet szárazra pároljuk. A maradékot etilacetát és víz elegyében felvesszük, az elegyet 5%-os citromsav-oldattal pH = 3 értékre savanyítjuk, majd vízzel mossuk. A szerves fázist elkülönítjük, szárítjuk és bepároljuk. A maradékot acetonitril és éter elegyéből átkristályosítjuk. A termék Rf-értéke 0,73 (szilikagél-rétegen, 5:3:2 arányú amüalkohol-piridin-víz elegyben). Hozam: 65%. 5 C) Z-Glu(OtBu)-His-(N-feniletil)-amid A fenti eljárást ismételjük meg azzal a különbséggel, hogy fenilalanin helyett |3-fenil-etilaminból indulunk ki. A termék Rf-értéke 0,47 (szilikagél-10 -rétegen, 9 : 1 arányú benzol-etanol elegyben). D) Z-Glu(OtBu)-His-Phe-NH2 1 g, az 5. példa A) lépésében kapott tripeptid-15 -észter 20 ml metanollal készített oldatában ammóniagázt vezetünk, majd az elegyet éjszakán át keverjük. A kivált csapadékot leszűrjük és metanol és éter elegyéből kristályosítjuk. 119—120C°-on olvadó terméket kapunk, Rf = 0,70 (szilikagél-réte-20 gen, 4 :0,75 : 0,25 :1 arányú butanol-piridin-ecetsav—víz elegyben). Hozam: 90%. E) Az A)-D) lépésekben kapott peptidek védőcsoportjainak eltávolítása 25 0,7 g peptid 18 ml tiszta metanollal készített oldatához 10%-os palládium/csontszén katalizátort adunk, és az elegybe a széndioxid-fejlődés megszűnéséig hidrogéngázt vezetünk. Az elegyet szűr-30 jük, és a szűrletet vákuumban 30 C° fürdőhőmérsékleten bepároljuk. A részben védőcsoport-mentesített peptidet azonnal feldolgozzuk. A következő peptideket kapjuk: 35 l.H-Glu(OtBu)-His-Phe-OMe Rf =0,35 2. H-Glu(OtBu)-His-Phe-OH Rf = 0,23 3. H-Glu(OtBu)-His-40 -Phe-NH2 Rf = 0,47 4. H-Glu(OtBu)-His-N-feniletil)-amid Rf = 0,41 Az Rf-értékeket szilikagél-rétegen, 5:3:2 ará-45 nyú amilalkohol-piridin-víz elegyben határoztuk meg. Hozam: 70 és 90% között. F) Az E) lépésben kapott peptidek kondenzációja D-Met-tel 50 3,91 g Boc-D-Met-N2 H 3 75 ml dimetilformamiddal készített, 0 C°-os oldatához 7,5 ml 4 n tetrahidrofurános sósavoldatot adunk, és az oldatot -20 C°-ra hűtjük. Az elegyhez 2,1 ml izo-55 amilnitritet adunk, és a kapott elegyet 5 percig keverjük. Ezután az elegy térfogatát 90 ml-re egészítjük ki. Az így kapott oldatot „aoldat"-nak nevezzük. A fenti művelettel egyidőben 5 mmól, az E) lé-60 pésben előállított tripeptidet 20 ml dimetilformamid és 2 ml víz elegyében oldunk, és az oldatot 0 C°-ra hűtjük. A tripeptid oldatához 30 ml ,,aoldat"-ot adunk. Az elegyet 72 órán át 0C°-on állni hagyjuk, majd 65 a dimetilformamidot lepároljuk, és a maradékot 8
