168696. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új noapeptidamid-származékok előállítására
17 168696 18 hassuk, valamennyi aminosavelemzést 5,7 n sósavval, tioglikolsav jelenlétében végrehajtott savas hidrolízis útján végeztük. 7. példa H-(Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Phe-Gly-Ile-Arg-Pro-NHC2H 5 előállítása a) H-(Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Phe-Gly-OtBu készítése 1,57 súlyrész H-Gly-OtBu-t és 4,0 súlyrész Z-Phe-OSU-t feloldunk 20 térfogatrész etilacetátban és az oldatot szobahőmérsékleten egy éjszakán át keverjük. A reakciókeveréket most nátriumhidrogénkarbonát 5%os vizes oldatával, 1 n sósavval és vízzel mossuk, magnéziumszulfáton szárítjuk és csökkentett nyomáson töményítjük. A maradékhoz petrolétert adunk és a kivált csapadékot szűrve, 3,5 súlyrész, (85%) 78—79 °C-on olvadó Z-Phe-GIy-OtBu-t kapunk. [a]g = -16,7° (c = 1,0, etanolban). Elemzés a C23H28 0 5 N 2 képlet alapján: számított: C = 66,97, H = 6,87, N = 6,79; talált: C =67,14, H=6,64, N=6,88. 7,0 súlyrész Z-Phe-Gly-OtBu-t feloldunk 50 térfogatrész metanolban. Katalizátorként palládiumkormot használva, az oldatot katalitikusan redukáljuk. A redukciót 5 órán keresztül folytatjuk. A reakciókeveréket ezután szűrjük és a szűrletet az oldószer elpárolásával töményítjük. A maradékot 10 térfogatrész acetonitrilben oldjuk és az oldathoz hozzáadunk 1,62 súlyrész Z-Ser-ODNP-t. A keveréket szobahőmérsékleten 1 napon át keverjük, majd az acetonitrilt elpároljuk. A maradékot etilacetátban oldjuk. Az oldatot 10%-os vizes ammóniaoldattal, 1 n sósavval és vízzel mossuk, vízmentes magnéziumszulfáton szárítjuk, majd az oldószer elpárolásával besűrítjük. A maradékot petroléterrel felvesszük és etilacetát-petroléter oldószerelegyből átkristályosítva, 1,41 súlyrész (70%) 105—106 °C-on olvadó Z-Ser-Phe-Gly-OtBu-t kapunk. [«g= -26,6° (c=0,74, etanolban). Elemzés a C26 H 33 0 7 N 3 képlet alapján: számított: C = 62,50, H = 6,66, N = 8,41; talált: C =62,91, H=6,38, N = 8,12. 1,34 súlyrész Z-Ser-Phe-Gly-OtBu-t feloldunk 50 térfogatrész metanolban. Az oldatot palládiumkorom katalizátor alkalmazásával 5 órán át katalitikusan redukáljuk. A reakciókeveréket szűrjük és a szűrletet szárazra pároljuk. A maradékot, 1,27 súlyrész H-(Pyr)GIu-His-Trp-OH-t és 0,83 súlyrész HONBI-t feloldunk 20 térfogatrész DMF-ben. Az oldatot jéggel hűtjük, majd 0,95 súlyrész DCC-t adunk hozzá és a rendszert egy éjszakán át reagálni hagyjuk. A keletkezett csapadékot szűrjük és a szűrletet bepároljuk. A maradékhoz acetonitrilt adunk és a keveréket melegítjük. A rendszerben jelenlevő szilárd anyagot szűrjük, majd 50%-os vizes etil-alkoholban átkristályosítva, 1,8 súlyrész (87%) H-(Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Phe-Gly-OtBu-t kapunk. [a ]g = _ 20,6° (c = 1,0, DMF-ben). Elemzés a C40 H 49 O 9 N 9 • 2 H2 0 képlet alapján: számított: C = 58,59, H=6,52, N = 15,38; talált: C = 59,02, H=6,62, N = 15,23. b) Z-ILe-Arg(N02 )-Pro-NHC 2 H 5 készítése 1,43 súlyrész Z-Arg(N02 )-Pro-NHC 2 H 5 -öt feloldunk 10 térfogatrész 25%-os HBr-ecetsavelegyben és az oldatot szobahőmérsékleten 40 percig állni hagyjuk. Most 80 térfogatrész vízmentes étert adunk hozzá. A kivált csapadékot szűrjük és szárítjuk. Párhuzamosan, 0,795 súlyrész Z-Ile-OH-t oldunk 10 térfogatrész dioxánban, majd az oldatot 0 °C-ra hűtjük. 5 Hozzáadunk 0,59 súlyrész HONBI-t és 0,68 súlyrész DCC-t és a keveréket 2 órán át keverjük. Szűréssel eltávolítjuk a csapadékot és a szűrletet hozzáadjuk a fenti módon előállított porhoz. Hozzáadunk még 0,84 térfogatrész trietilamint és a rendszert szobahőmérsékleten 10 12 órán át keverjük. Elpároljuk a dioxán oldószert és a maradékot feloldjuk 100 térfogatrész kloroformban. Az oldatot 0,1 n sósavval, nátriumhidrogénkarbonát 5%-os vizes oldatával és vízzel mossuk, vízmentes magnéziumszulfáton szárítjuk és ä kloroform elpárolásával 15 besűrítjük. A maradékot éterrel triturálva csapadék válik ki, amelyet etanol-éter oldószerelegyből átkristályosítva 1,1 súlyrész, 103—105 °C-on olvadó (bomlás) Z-IIe-Arg(N02)-Pro-NHC2 H 5 -öt kapunk. [a]g=-58,l° (c = 1, metanolban). 20 Elemzés a C27 H 42 0 7 N 8 • 1/2 H 2 0 képlet alapján: számított: C = 54,08, H = 7,23, N = 18,68; talált: C =53,80, H=7,15, N = 18,84. c) 0,177 súlyrész Z-Ile-ArgíNO^-Pro-NHCjHj-öt feloldunk 3 térfogatrész 25%-os HBr-ecetsavelegyben. 25 Az oldatot 30 percig szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd 50 térfogatrész vízmentes étert adunk hozzá. A kivált csapadékot szűrjük, éterrel gondosan mossuk. Szárítás után megkapjuk a kondenzáció amin-összetevőjét. E művelettel párhuzamosan, 0,221 súlyrész H-(Pyr)-30 Glu-His-Trp-Ser-Phe-Gly-OtBu-t feloldunk 5 térfogatrész trifluorecetsavban és az oldatot 40 percig szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Az oldathoz előbb 0,05 térfogatrész 5,7 n sósavat, majd 50 térfogatrész étert adunk. A kivált csapadékot szűrjük, szárítjuk és újra-35 oldjuk 3 térfogatrész DMF-ben, majd az oldatot 0 °C-ra hűtjük. Az oldathoz most hozzáadjuk a fenti úton készített amint, valamint hozzáadunk még 0,097 súlyrész HONBI-t, 0,111 súlyrész DCC-t és 0,126 térfogatrész trietilamint. Az így kapott reakciókeveréket 0 °C-on 40 5 órán át, majd szobahőmérsékleten további 10 órán át keverjük. A reakció során csapadékként keletkezeit DC-karbamidot szűréssel eltávolítjuk és a szűrletet csökkentett nyomáson bepároljuk. A maradékot feloldjuk 10 térfogat 10%-os vizes etanolban és az oldatot Amber-45 lite XAD-2 gyantával töltött oszlop tetejére öntjük. Az oszlopról az anyagot 10%-os vizes etanol-80%-os vizes etanol lineáris gradiensű rendszerrel oldjuk le. A kívánt terméket tartalmazó fő frakciókat gyűjtjük, az oldószer elpárolásával töményítjük. Liofilizálás után 50 0,085 súlyrész H-(Pyr)GIu-His-Trp-Ser-Phe-Gly-ILe-Arg(N02 )-Pro-NHC 2 H 5 -öt kapunk. A fenti módon kapott termékből 0,07 súlyrészt feloldunk 0,02 térfogatrész anizol-0,02 térfogatrész 2-merkaptoetanol és 4 térfogatrész vízmentes hidrogénfluorid 55 elegyében. Az oldatot 0 °C-on 1 órán át keverjük, majd a hidrogénfluoridot csökkentett nyomáson elpároljuk. A maradékot szárítószekrényben szárítjuk, feloldjuk 50 térfogatrész vízben és az oldatot átbocsátjuk Amberlite IRA-400 (acetát-ciklus) gyantával töltött oszlopon. 60 Az oszlopról távozó oldatot liofilizálva, 0,075 súlyrész nyersterméket kapunk. Ezt a terméket karboximetilcellulóz oszlopon adszorbeáljuk, amelyről 0,005 n ammóniumacetát-0,2 n ammóniumacetát lineáris gradiensű rendszerrel eluáljuk. A kívánt terméket tartalmazó fő 65 frakciókat egyesítjük és liofilizáljuk. Az így kapott ter-9
