168674. lajstromszámú szabadalom • Eljárás alfa-melanotropin, továbbá dibrómozott, illetve triciált származéka előállítására
3 168674 4 acetil-tetrapeptidésztert kapunk, ami hidraziddá, majd aziddá alakítva a már korábban ismert [Ann. Univ. Budapest Sect. Chim. 13, 25 (1972)] H-Glu(OtBu)-His-Phe-Arg-Trp-Gly-OH (OtBu= terc-butilészter) hexapeptiddel az Ac-Ser-Dbt-Ser-Met-Glu(OtBu)-His-Phe-Arg-Trp-Gly-OH dibróm-tirozint tartalmazó dekapeptiddé kapcsolható. Ezt a kristályosítható dekapeptidet valamilyen önmagában ismert kondenzációs módszer segítségével a H-Lys(BOC)-Pro-Val-NH2 tripeptidamiddal [Helv. Chim. Acta 46, 870 (1963)] az Ac-Ser-Dbt-Ser-Met-Glu(OtBu)-His-Phe-Arg-Trp-GIy-Lys(BOC)-Pro-Val-NH2 szerkezetű védett tridekapeptidamiddá alakíthatjuk, melyről acidolízissel a terc-butilészter és terc-butiloxikarbonil csoportokat eltávolítva nyerjük az a-melanotropin dibróm-származékát (Dbt2 -oe-meIanotropin). E vegyület katalitikus hidrogénezéssel a-melanotropint szolgáltat, melynek fizikai állandói és biológiai aktivitása a természetes polipeptidhormonéval megegyeznek. A megfelelő katalitikus triciálással e dibróm-tirozint tartalmazó tridekapeptid-amidból a 2 helyen levő tirozin-rész 3,5-triciált oc-melanotropin keletkezik, mely ugyancsak teljes biológiai hatásúnak bizonyul. A 3,5-dibróm-tirozint tartalmazó intermedierek a tirozint tartalmazó analóg vegyületektől megnövekedett vékonyréteg kromatográfiás Rf -értékükkel is különböznek. A találmány szerint tehát úgy járunk el, hogy egy 12 3 4 Ac-Ser-Dbt-Ser-Met-N2 H 3 képletű — a képletben Ac és az 1, 3, 4 helyen levő szimbólumok jelentése a célvegyület képleténél megadott, Dbt pedig 3,5-dibrómtirozin-csoportot jelent — tetrapeptidhidrazidból készített azidot egy 5 6 7 8 9 10 H-GluíX^-His-Phe-Arg-Trp-GIy-OH képletű hexapeptiddel — a képletben az 5—10 helyen levő szimbólumok jelentése változatlanul a fenti és X1 a peptidkémiában ismert és szokásos védőcsoportot, célszerűen észtercsoportot jelent — kondenzáljuk, majd a kapott, 1—10 helyen levő csoportokat tartalmazó dekapeptidet egy 11 12 13 H-Lys(X2 )-Pro-Val-NH 2 képletű — e képletben a 11—13 helyen levő szimbólumok jelentése a fent megadott és X2 a peptidkémiában ismert és szokásos védőcsoportot jelent — képletű tripeptid-amiddal kondenzáljuk. Eljárhatunk azonban úgy is, hogy egy 5 6 7 8 9 10 Z-GluíX^-His-Phe-Arg-Trp-Gly-OH képletű, az 5 helyen levő glutamin-csoporton védett hexapeptid és egy 11 12 13 Lys(X2 )-Pro-Val-NH 2 képletű, a 11 helyen levő lizincsoportján védett tripeptid-amid kondenzálásával kapott termék hidrolízise során keletkező 5 6 7 8 9 10 11 12 13 H-Glu(X1 )-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys(X 2 )-Pro-Val-NH 2 képletű — a képletekben Xlt X 2 , valamint az 5—13 helyen levő szimbólumok jelentése a fent megadott — nonapeptid-amid hidrogenolízisével kapott termékkel kondenzáljuk. Ezután a két találmány szerinti eljárásváltozattal kapott polipeptid-amid az 5 helyen levő glutamincsoportjáról, valamint a 11 helyen levő lizincsoportjáról a védőcsoportokat eltávolítjuk, s kívánt esetben a 2 helyen levő tirozin-csoport 3,5-helyzetű brómatomjait katalitikus redukcióval hidrogénatomra vagy tríciumatomra cseréljük. A találmányunk szerinti eljárás, s az eljárással készült termék az említett előnytelenségek egyikét sem mutatja. 5 Eljárásunk egyrészt specifikus pozícióban jelölt a-melanotropin (oc-MSH) előállítását teszi lehetővé, s megszünteti az eddig a kapcsolások során tapasztalt specifikus aktivitáscsökkenést, másrészt az eddigi előállítások során minden esetben tapasztalt káros mellék -10 reakciókat (pl. autoradiolízis) teljes mértékben kizárja. A találmány szerinti eljárást az alábbi példákon mutatjuk be, megjegyezve, hogy a megadott Rf -értékek szilikagél (Kieselgel) adszorbensen végzett vékonyrétegkromatográfiás vizsgálatok eredményei. 1. példa A 2 helyen levő tirozin-csoportján 3,5-dibrómozott 20 acetil-( 1 -4-tetrapeptid)-hidrazid 12 3 4 [Ac-Ser-Dbt-Ser-Met-N2 H 3 ] előállítása. 36,2 g (0,2 mól) L-tirozint 150 ml jégecetben szuszpendálunk, majd keverés közben 96,0 g (30,8 ml; 25 0,6 mól) bróm 130 ml jégecetben készült oldatát csepegtetjük hozzá. Közben a hőmérséklet 55—60 C°-ra emelkedik és tiszta, vöröses színű oldat keletkezik. A brómoldat hozzáadása után az elegyet 50—55 C°-on még 2 órán át keverjük, azután lehűlni hagyjuk, mire 30 a dibrómtirozin hidrobromidja kikristályosodik. Szűrés és éteres mosás után 33,3 g (39,7%) anyag keletkezik, a többit a szárazra párolt anyalúg éteres elegyítésével, a termék szűrésével és éteres mosásával nyerjük. Össztermelés: 68,5 g (81,8%) 3,5-dibróm-tirozin-hidrobromid. 35 Az így kapott kromatográfiásan egységes hidrobromidot 350 ml vízben oldjuk, csontszénnel kezeljük, szűrjük és hidegen tömény ammóniumhidroxid-oldattal pH=6 értékre Iúgosítjuk. A kikristályosodó 3,5--dibrómtirozint (H-Dbt-OH) leszűrjük és vízzel mossuk. 40 Termelés: 50,6 g (74,5%). Rf =0,50 (etilacetát-piridin-jégecet-víz 30 : 20 : 6 : 11 arányú elegyében) [«]|^2 = 4,49° ±0,07° (c=0,84, 1 n sósav). 45 Elemzés a C9 H 9 O s NBr 2 (339,0) képlet alapján: C H N Br számított: 31,89%, 2,68%, 4,13%, 47,15%; talált: 31,7 %, 2,6 %, 4,1 %, 47,3 %. 50 200 ml vízmentes metilalkoholt —20 C°-ra hfltünk és olyan lassan csepegtetünk hozzá 37,7 ml (0,52 mól) tionilkloridot, hogy a hőmérséklet —15 C° fölé ne emelkedjék. További 10 perc múlva —10 C°-os hőmérsékle-55 ten keverés közben hozzáadunk 44,0 g (0,13 mól) fenti módon készült 3,5-dibrómtirozint, amely gyorsan feloldódik. Újabb 10 perc keverés után nem hűtjük tovább és éjszakán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Bepárolás után a maradékot metanolban feloldjuk és újra 60 bepároljuk, majd kevés metanolban oldva éter hozzáadásával kikristályosítjuk a 3,5-dibróm-tirozin-metilészter-hidrokloridot (H-Dbt-OMe. HCl). Termelés: 50,8 g (98%), op.: 185—187 C°, Rf= 0,65 (etilacetát-piridin-jégecet-víz 120 : 20 : 6 :11 65 arányú elegyében), 2
