168674. lajstromszámú szabadalom • Eljárás alfa-melanotropin, továbbá dibrómozott, illetve triciált származéka előállítására
5 168674 6 Rf =0,35 (etilacetát-piridin-jégecet-víz 240:20:6:1 arányú elegyében), [a]g' = 8,8° (c=l, metanol). Elemzés a C10 H 12 O 3 NB 2 Cl (389,5) képlet alapján: C H N Br számított: 30,83%, 3,11%, 3,60%, 41,04%; talált: 30,6%, 3,2%, 3,5%, 40,8%. 6,60 g (30 millimól) terc-butiloxikarbonil-szerin-hidrazidot [előállítása: Helv. Chim. Acta 44 169 (1961)] 50 ml dimetilformamidban oldunk, az oldatot —10 C°ra hűtjük, 15 ml (90 millimól) előre Iehűtött 6 n sósavat csepegtetünk hozzá keverés közben, majd ugyanezen a hőmérsékleten 2,07 g (30 millimól) nátriumnitrit tömény vizes oldatát adjuk hozzá, végül 10 percig keverjük —10 C° és —5 C° közt. 10,9 g (28 millimól) 3,5-dibrómtirozin-metilészter-hidrokloridot 50 ml dimetilformamidban oldva 12,4 ml (90 millimól) trietilamint adunk hozzá, majd az észterbázis oldatát az elkészített azidhoz adjuk és —5 C°-on keverjük az elegyet 2 órán át, végül éjszakán át hűtőszekrényben állni hagyjuk. Bepárlás után a maradékot 180 ml etilacetátban oldjuk, 10%-os hideg citromsavoldattal, majd nátriumhidrogénkarbonát-, és konyhasóoldattal mossuk, szárítjuk és bepároljuk. Az etilacetát-petroléterből kristályosítható anyag a terc-butiloxikarbonil-csoporttal védett szeril-dibrómtirozin-metilészter (BOC-Ser-Dbt-OMe). Termelés: 10,9 g (67,4%); op.: 122—125 C°, Rf=0,50 (aceton: toluol 1 : arányú elegyében). Elemzés a C18 H 24 0 7 N 2 B 2 (540,2) képlet alapján: C H N Br számított: 40,01%, 4,48%, 5,19%, 29,59%; talált: 40,01%, 4,5%, 5,3%, 29,8%. 10,8 g (20 millimól) az előbb ismertetett módon készített dipeptidésztert 45 ml metilalkoholban oldunk, 7,0 ml 98%-QS hidrazinhidrátot adunk hozzá és éjszakán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk. A kivált anyagot leszűrjük, hideg metanollal mossuk és megszárítjuk. Tisztításra kevés jéghideg 1 n sósavban oldjuk és 10%-os nátriumkarbonátoldattal csapjuk ki. Szűrés után kb. 400 ml vízből átkristályosítjuk. A kapott anyag a terc-butiloxikarbonil-csoporttal védett szeril-dibrómtirozin-hidrazid (BOC-Ser-Dbt-N2 H 3 ). Termelés: 7,50 g (69,4%), op.: 197—199 C°, Rf =0,55 (etilacetát-piridin-jégecet-víz 240: 20: 6 : 11 arányú elegyében), Rf =0,52 (aceton-toluol 1: 1 arányú elegyében). Elemzés a C17 H 24 O e N 4 Br 2 (540,2) képlet alapján: C H N Br számított: 37,79%, 4,48%, 10,37%, 29,59%; talált: 37,7%, 4,5%, 10,3%, 29,6%. 5,40 g (10 millimól) az előbbiek szerint előállított dipeptid-hidrazidot 30 ml dimetilformamidban oldunk, az oldatot —10 C°-ra lehűtjük és keverés közben 5 ml (30 millimól) előre Iehűtött 6 n sósavat adunk hozzá. Az elegy hőmérsékletét továbbra is —10 C°-on tartva keverés közben 690 mg (10 millimól) nátriumnitrit tömény vizes oldatát csepegtetjük hozzá, majd még 5 percig keverjük —5 C° és —10 C° közt. Ezután 2,87 g (10 millimól) szeril-metionin-metilészter-hidrokloridot [előállítása: J.A.C.S. 79 1636 (1957)] 20 ml dimetilformamidban oldunk, 4,14 ml (30 millimól) trietilamint 5 adunk hozzá, s az észterbázis oldatát a fenti azidhoz öntjük. Két órán át —5 C°-on keverjük, majd az elegyet éjszakán át jégszekrényben állni hagyjuk. Bepárlás után a maradékot etilacetátban oldjuk, jéghideg 5%-os citromsavoldattal, telített nátriumhidrogénkar-10 bonát-oldattal és 10%-os konyhasóoldattal mossuk, szárítjuk és bepároljuk. A maradékot éterrel eldörzsölve szűrőre visszük és metanolból átkristályosítjuk. Az így kapott anyag szeril-dibrómtirozil-szeril-metionin-metilészter (BOC-Ser-Dbt-Ser-Met-OMe). 15 Termelés: 4,32 g (56,9%), op.: 110—114 C° Rf = 0,40 (etilacetát-piridin-jégecet-víz 240: 20: 6: 11 arányú elegyében), Rf =0,75 (etilacetát-piridin-jégecet-víz 120: 20: 6: 11 arányú elegyében). 20 Elemzés a C26 H 38 O 10 N 4 B 2 S (758,5) képlet alapján: C H N Br számított: 41,17%, 5,05%, 7,39%, 21,07%; talált: 41,2%, 5,0%, 7,5%, 20,9%. 25 3,04 g (4 millimól) 30 ml 90%-os trifluorecetsavban oldunk, mely 1 csepp merkaptoetanolt is tartalmaz, és 30 percig szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Bepárlás után a maradékot kevés metanolban oldjuk, bepároljuk, 30 s az újraoldást és bepárlást még egyszer megismételjük. Szárítás után a terméket peroxidmentes éterrel eldörzsöljük és szűrjük. Az így kapott termék szeril-dibrómtirozil-szeril-metionin-metilészter-trifluoracetát (H-Ser-Dbt-Se-Met-OMe. CF3 COOH). 35 Termelés: 3,16 g (közel kvantitatív), op.: 205—208 C° (metilalkoholból átkristályosítva), Rf =0,40 (etilacetát-piridin-jégecet-víz 60:20:6: 11 arányú elegyében), Rf =0,66(metiletilketon-piridin-víz 200: 15:20 ará-40 nyú elegyében). Az így kapott tetrapeptid-metilészter-trifluoracetát 2,55 g (3,3 millimól) mennyiségét 40 ml piridinben oldjuk, 1,37 ml (9,9 millimól) trietilamint, majd 1,2 g (6,6 millimól) p-nitrofenilacetátot adunk hozzá és a 45 reakcióelegyet éjszakán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Bepárlás után a maradékot metanolban oldjuk, ismét bepároljuk, majd peroxidmentes éterrel eldörzsölve távolítjuk el a p-nitrofenilacetát feleslegét. A terméket metanolból kristályosítjuk át. Ily módon 50 Ac-Ser-Dbt-Ser-Met-OMe képletű acetil-szeril-dibrómtirozil-szeril-metionin-metilésztert kapunk. Termelés: 2,11 g (91,3%), op.: 248—252 C° (ismételt átkristályosítás után). Rf =0,75 (etilacetát-piridin-jégecet-víz 60:20:6:11 55 arányú elegyében), Rf =0,80 (metiletilketon-piridin-víz 200: 15 : 20 arányú elegyében). Elemzés a C23 H 32 O fl N 4 Br 2 S (700,4) képlet alapján: 60 N Br számított: 8,00%, 22,82%; talált: 8,00%, 22,5%. 1,54 g (2,2 millimól) előbb kapott acetil-tetrapeptid-65 -metilésztert 10 ml meleg metanolban oldunk, 2,3 ml 3
